雷公藤甲素對(duì)MV4-11細(xì)胞的增殖影響及RAS-ERK-MAPK通路相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　觀(guān)察雷公藤甲素（TP）對(duì)FLT3-ITD突變陽(yáng)性急性髓系白血?。ˋML）細(xì)胞株MV4-11的增殖抑制和促凋亡作用，并檢測(cè)RAS/ERK/MAPK通路上相關(guān)基因的表達(dá)，探討其可能的抗白血病作用機(jī)制，為雷公藤甲素應(yīng)用于FLT3-ITD突變陽(yáng)性AML的臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　采用不同濃度的TP分別處理MV4-11細(xì)胞株，在不同的時(shí)間點(diǎn)，采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測(cè)細(xì)胞的增殖抑制率，用Anne

2、xin V-FITC/PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)FLT3、RAS、ERK、FOXM1、c-Myc的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.MTT法檢測(cè)并計(jì)算不同濃度的TP分別作用于MV4-11細(xì)胞24h、48h和72h的增殖抑制率，觀(guān)察到TP對(duì)MV4-11細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用，且隨著藥物濃度的增加及作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其增殖抑制率呈逐漸增高趨勢(shì)，存在明顯的劑量-時(shí)間依賴(lài)

3、性。TP作用于MV4-11細(xì)胞24h、48h和72h的IC50值分別為56.86、16.59、3.42nmol/L。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)0、10、20 nmol/L的TP分別作用于MV4-11細(xì)胞后，48h的凋亡率分別為（4.47±0.25）％、（17.30±0.56）%、（35.77±0.55）%，72h的凋亡率分別為(6.80±0.66）%、（49.83±0.45）%、（68.90±0.75）%。并觀(guān)察到隨著TP的濃度增高

4、或作用時(shí)間延長(zhǎng)，凋亡率逐漸增加，呈時(shí)間-劑量依賴(lài)性。
　　3.熒光定量PCR檢測(cè)0、10、20nmol/L的TP分別作用于MV4-11細(xì)胞48h后，F(xiàn)LT3mRNA的表達(dá)明顯下降，同時(shí)RAS、ERK、FOXM1、c-Myc的mRNA的表達(dá)均降低，且隨著TP藥物濃度的增高，各基因的相對(duì)表達(dá)量均逐漸下降，也存在劑量依賴(lài)性。
　　結(jié)論：
　　雷公藤甲素作用于FLT3-ITD突變陽(yáng)性急性髓系白血病細(xì)胞株MV4-11后，能明顯抑