雷公藤甲素對阿霉素腎病大鼠足細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　通過實(shí)驗(yàn)觀察雷公藤甲素對阿霉素腎病(ADR)大鼠足細(xì)胞凋亡的影響并初步探討雷公藤甲素減輕足細(xì)胞損傷的作用機(jī)制。
　　方法:
　　將45只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為對照組（N）、阿霉素腎病模型組（ADR）及雷公藤干預(yù)組（T）。其中ADR組和T組大鼠經(jīng)尾靜脈一次性注射阿霉素6.5mg/kg構(gòu)建阿霉素腎病大鼠模型，而N組大鼠則經(jīng)尾靜脈一次性注射同體積的生理鹽水。模型建立后，T組給予雷公藤甲素(200ug/kg?

2、d)干預(yù)8周。于2、4、6、8周分別檢測24h尿蛋白定量（24hUTP），于8周末采血，觀察各組大鼠的生化指標(biāo)如血尿素氮（BUN）、肌酐(Scr)、胱抑素C（CysC），并在光鏡、電鏡下觀察腎組織學(xué)改變，應(yīng)用TUNEL法檢測足細(xì)胞凋亡，免疫組織化學(xué)染色檢測腎母細(xì)胞瘤基因（WT-1）半定量計(jì)數(shù)足細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測足細(xì)胞標(biāo)志物突觸極蛋白Synaptopodin、凋亡相關(guān)因子p53及Notch1 mRNA的表達(dá)

3、變化，蛋白質(zhì)印記法（western）測定Synaptopodin、Notch1、Hes1的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)ADR組各時(shí)間點(diǎn)24h尿蛋白定量、BUN、Scr以及CysC指標(biāo)均高于N組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而足細(xì)胞密度顯著降低(P＜0.05)，腎小球系膜區(qū)增寬，且系膜細(xì)胞增生；T組Scr、CysC、24h尿蛋白定量低于ADR組（P＜0.05）；足細(xì)胞密度明顯增加(P＜0.05)；同時(shí)觀察到腎小球病

4、理改變程度較ADR組減輕。
　　（2）8周末時(shí)，ADR組Synaptopodin mRNA和蛋白表達(dá)降低，p53 mRNA表達(dá)升高，足細(xì)胞體積腫脹增大，凋亡足細(xì)胞數(shù)目比N組明顯增多(P＜0.05)；與ADR組相比，T組Synaptopodin mRNA和蛋白表達(dá)增加，p53 mRNA表達(dá)下降，凋亡足細(xì)胞數(shù)目較ADR組明顯減少(P＜0.05)。
　　(3)結(jié)合RT-PCR及western結(jié)果顯示ADR組Notch1 mRNA和

5、蛋白的表達(dá)以及Hes1蛋白的表達(dá)均高于N組（P＜0.05）,T組Notch1 mRNA和蛋白的表達(dá)及Hes1蛋白的表達(dá)低于ADR組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.阿霉素腎病大鼠模型中存在足細(xì)胞損傷、凋亡；在大鼠足細(xì)胞凋亡數(shù)增加的同時(shí)Notch信號通路的相關(guān)指標(biāo)Notch1、靶基因Hes1的表達(dá)量增加，而且凋亡相關(guān)因子p53的表達(dá)同樣增加，而足細(xì)胞標(biāo)志蛋白Synaptopodin表達(dá)減少；
　　2.Notch信號