雷公藤甲素對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)新生大鼠心臟成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、背景： 心肌纖維化(myocardial fibrosis，MF)是指在各種致纖維化因素的作用下心肌膠原纖維不成比例的增多。其病因主要包括缺血性心臟病(或心肌病)、高血壓性心臟病、炎癥性心肌病、代謝性心肌病、肥厚型心肌病等。心臟由心肌細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞組成，間質(zhì)細(xì)胞占心臟細(xì)胞總數(shù)的2/3，其中心臟成纖維細(xì)胞占絕大多數(shù)(>90％)。心臟成纖維細(xì)胞具有增殖能力，構(gòu)成心肌間質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的基本結(jié)構(gòu)蛋白I、III型膠原主要是由其分泌的。在心肌纖維化

2、的過程中，心臟成纖維細(xì)胞增殖及其合成分泌的膠原增多，即心肌間質(zhì)構(gòu)型重建，這些變化將導(dǎo)致心肌代謝及功能異常，使其僵硬度增高、舒縮功能障礙，最終引發(fā)心力衰竭。雷公藤甲素(Triptolide，TP)作為一種非特異性免疫調(diào)節(jié)藥廣泛應(yīng)用于臨床治療風(fēng)濕等自身免疫性疾病已有多年，國內(nèi)外有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，TP能夠抑制人眼球后成纖維細(xì)胞和皮膚瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖，但其對心肌纖維化的影響，尚無相關(guān)報道。本課題組之前的動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，TP能夠抑制自發(fā)性

3、高血壓大鼠的心肌纖維化，但具體機(jī)制尚未闡明。因此，本實驗研究目的是觀察TP是否能夠通過抑制心肌成纖維細(xì)胞增殖及膠原的合成，從而發(fā)揮逆轉(zhuǎn)心肌纖維化的作用，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討TP逆轉(zhuǎn)心肌纖維化的機(jī)理。 目的： 觀察TP是否能夠通過抑制心肌成纖維細(xì)胞增殖及膠原的合成，從而發(fā)揮逆轉(zhuǎn)心肌纖維化的作用，并初步探討TP逆轉(zhuǎn)心肌纖維化的可能機(jī)理。 方法： 消化法獲得并培養(yǎng)新生SD大鼠心臟成纖維細(xì)胞。實驗分組：對照組：含

4、有DMEM的培養(yǎng)液；AngII組：培養(yǎng)液中加入終濃度為10-7mol/L的AngII；TP(100μg/L)組：培養(yǎng)液中同時加入終濃度為100μg/L的TP和10-7mol/L的AngII；TP(10μg/L)組：培養(yǎng)液中同時加入10μg/L的TP和10-7mol/L的AngII；TP(1μg/L)組：培養(yǎng)液中同時加入1μg/L的TP和10-7mol/L的AngII。MTT比色法測定細(xì)胞增殖；羥脯氨酸法測定膠原合成；ELISA法測定TG

5、F-β1的分泌；WesternBlot檢測MAPK中細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)的含量。觀察AngII對心肌成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的影響及不同濃度TP的干預(yù)作用。 結(jié)果： 1、和空白組相比，加入AngII后，顯著促進(jìn)了CFb的增殖(P<0.05或P<0.01)高濃度組TP(100μg/L)在藥物作用的24小時即表現(xiàn)出抑制CFb增殖的作用(P<0.01)，于48小時達(dá)高峰(P<0.001)，72小時后開始減弱

6、。提示TP發(fā)揮藥效的最佳時間在2～3天左右。 2、隨AngII作用時間增加，膠原合成含量增加，與對照組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)，TP作用24h、48h、72h后各組膠原含量與AngII組比較均有顯著性差異，高濃度組TP(100μg/L)在作用48小時達(dá)高峰(P<0.001)。 3、AngII作用24小時后，TGF-β1表達(dá)明顯增加(P<0.01)，加入不同濃度組TP作用24小時后，TGF-β1表達(dá)水

7、平明顯降低(P<0.05或P<0.01)。 4、AngII作用30min后，ERK1/2的磷酸化水平與陰性對照組相比明顯增強(qiáng)(P<0.05)；加入100μg/L TP30min后，p-ERK1/2的表達(dá)與AngII組相比有降低趨勢(P<0.05)；而1μg/L、10μg/L TP則未能明顯抑制AngII導(dǎo)致的ERK1/2磷酸化；陽性對照藥物U0126顯著抑制了ERK1/2的磷酸化(P<0.01)。 結(jié)論： Ang