青霉T24-2固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶及其纖維素酶系組份分離純化的研究.pdf

1、廈門大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明茲呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考的其他個人或集體的研究成果，均在文中以明確方式標(biāo)明。本人依法享有和承擔(dān)由此論文產(chǎn)生的權(quán)利和責(zé)任。摘要青霉T242是一株具有較高固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶能力的菌株。本文通過對青霉T242的固態(tài)發(fā)酵條件進(jìn)行研究，確定了該菌株的最佳產(chǎn)酶條件為：固體培養(yǎng)基蔗麩比為4：6，添加O2％尿素為氮源，按10％接種量接種種齡為18h的菌懸液，每250mL三角瓶中固體

2、培養(yǎng)基裝瓶量309(干重109)，pH自然，30℃下培養(yǎng)3d。最佳糖化條件為：曲料比l：3，加水比1：6，在50℃，170r／min條件下糖化18h，最高糖化率可達(dá)324％，每1009甘蔗渣糖化液經(jīng)釀酒酵母發(fā)酵后，酒精產(chǎn)量可達(dá)1139。甘蔗渣經(jīng)4％“甲基亞砜預(yù)處理后，制曲并糖化，CMCase和FPA酶活分別可達(dá)21938U／g和1607U／g，糖化率為2192％。采用酸堿分批不浸泡的預(yù)處理方式，CMCase和FPA酶活分別達(dá)到2223U

3、／g和1677U／g，糖化率可達(dá)2334％，能夠滿足后期糖化液發(fā)酵產(chǎn)酒精的要求。青霉T242粗酶液依次經(jīng)苯基疏水柱(Phenyl6FastFlow)與凝膠柱(SephadexG200)分離純化得到內(nèi)切p1，4一葡聚糖酶；經(jīng)丁基疏水柱(Butyl4FastFlow)與離子交換柱(DEAESepharoseFastFlow)分離純化得到B葡萄糖苷酶；經(jīng)離子交換柱(DEAESepharoseFastFlow)單柱純化得到木聚糖酶。上述三種組分

4、經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，分子量分別為40kD，55kD和20kD。其中，內(nèi)切B1，4葡聚糖酶純化了315倍，比活力由206U／mg提高到648U／mg；p葡萄糖苷酶純化了367倍，比活力由O33U／mg提高到121U／mg；木聚糖酶純化了372倍，比活力由154U／mg提高到574U／mg。內(nèi)切p1，4葡聚糖酶和木聚糖酶的最適反應(yīng)pH為65，p葡萄糖苷酶的最適反應(yīng)pH為50，上述三種組分的最適反應(yīng)溫度均為50“C。內(nèi)切p1，4葡