道地產(chǎn)區(qū)丹參內(nèi)生真菌組成及其功能的初步研究.pdf

1、丹參（Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma）為唇形科植物丹參 Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖。主要含丹參酮類(lèi)和丹酚酸兩類(lèi)成分。河南、山東、四川是丹參的道地產(chǎn)區(qū)。道地藥材質(zhì)量除受遺傳因素的主導(dǎo)外，適宜的生長(zhǎng)環(huán)境也是形成其優(yōu)良品質(zhì)的必要條件。內(nèi)生菌作為構(gòu)成植物內(nèi)環(huán)境的重要組成部分，與宿主植物長(zhǎng)期協(xié)同進(jìn)化，形成了互利共生的關(guān)系，與優(yōu)質(zhì)藥材的形成有關(guān)。
　　本研究采用

2、純培和非純培結(jié)合法對(duì)道地產(chǎn)區(qū)丹參內(nèi)生真菌的群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，并通過(guò)內(nèi)生真菌與丹參懸浮細(xì)胞共培養(yǎng)的方法，初步驗(yàn)證了內(nèi)生真菌對(duì)丹參酮類(lèi)代謝產(chǎn)物合成的影響。
　　首先，純培法從河南方城、山東臨沂、四川中江3個(gè)產(chǎn)地15株丹參的根中分離得到48株內(nèi)生真菌。經(jīng)ITS區(qū)rDNA序列分析，鑒定為4綱7目8科8屬9種，分屬于子囊菌亞門(mén)和半知菌亞門(mén)，其中以其中Alternaria alternata（互隔交鏈孢霉）為優(yōu)勢(shì)菌種，占總菌株數(shù)的27.08

3、％。
　　其次，采用DGGE結(jié)合測(cè)序的方法對(duì)3個(gè)道地產(chǎn)區(qū)丹參內(nèi)生真菌的群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究。基于真菌ITS區(qū)rDNA，采用nested-PCR方法，對(duì)3個(gè)道地產(chǎn)區(qū)丹參內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行了DGGE分析，并將DGGE圖譜中可見(jiàn)條帶切膠回收后克隆測(cè)序。所得序列進(jìn)行 BLAST比對(duì)后，獲得18種菌，其中，純培法中未得到的有12種內(nèi)生真菌在DGGE中可見(jiàn)，4綱7目7科7屬8種（其中有4種無(wú)法確定其種類(lèi)），以Alternaria altern

4、ata（互隔交鏈孢霉）為優(yōu)勢(shì)種。遺傳多樣性分析表明，丹參內(nèi)生真菌的多樣性與其所處的環(huán)境關(guān)系密切，環(huán)境條件相似的產(chǎn)區(qū)內(nèi)生真菌遺傳多樣性越相近。純培法與非純培法結(jié)合共獲得內(nèi)生真菌21種。
　　最后，通過(guò)內(nèi)生真菌與丹參懸浮細(xì)胞共培養(yǎng)結(jié)合HPLC法測(cè)定培養(yǎng)物種丹參酮類(lèi)化合物的含量，結(jié)果表明內(nèi)生真菌對(duì)丹參酮類(lèi)化合物的積累與合成產(chǎn)生影響。不同的內(nèi)生真菌對(duì)丹參酮類(lèi)化合物的影響不同，同一種內(nèi)生真菌對(duì)丹參酮類(lèi)化合物也可產(chǎn)生不同的影響。篩選出了促進(jìn)丹