釀酒葡萄內(nèi)生真菌、次生代謝產(chǎn)物初步研究.pdf

1、20世紀(jì)90年代以后，植物內(nèi)生真菌研究范圍擴(kuò)大，不再僅限于禾本科植物，開始傾向從木本植物體內(nèi)分離內(nèi)生真菌，研究其生物多樣性、生物學(xué)作用、內(nèi)生機(jī)理、與宿主之間的關(guān)系以及新型活性化合物研究等。 本文對(duì)一個(gè)引種實(shí)驗(yàn)葡萄園中釀酒葡萄的內(nèi)生真菌資源進(jìn)行調(diào)查，分析其群落構(gòu)成和種群系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，對(duì)這些菌株的抗植物病原真菌、抗人類病原菌活性進(jìn)行了初步研究；對(duì)活性菌株A23的代謝產(chǎn)物進(jìn)行活性追蹤，對(duì)其分離純化得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定和抗植物病原真

2、菌活性研究；同時(shí)對(duì)同一葡萄園的果實(shí)所釀造的葡萄酒進(jìn)行檢測(cè)，確定分離到的內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物Enniatin B是否對(duì)葡萄酒造成污染。從釀酒葡萄植株的根、枝條、葉片、果實(shí)等組織共分離得到內(nèi)生真菌455株，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，內(nèi)生真菌的種類和數(shù)量與宿主健康狀況相關(guān)，引種成活率較高的植株內(nèi)生真菌分離率較高，而引種成活率低的植株內(nèi)生真菌分離率相應(yīng)很低，分析其群落構(gòu)成和發(fā)育關(guān)系，表明Alternaria，Penicillium，Pusarium是優(yōu)勢(shì)種群，

3、一些真菌為潛在的植物病原真菌，如Diapor the phaseolorum，Aspergillusoryzae，Pusarium equiseti，Pestalotiopsis，uvicola等；以黃瓜炭疽病菌、棉花黃萎病菌、棉疫霉果腐病菌為指示菌，初篩采用對(duì)峙法測(cè)定了103株內(nèi)生真菌的抗菌活性，復(fù)篩使用濾紙片法，初篩得到活性菌株30株，占總數(shù)的29.1％，復(fù)篩顯示，有8株菌對(duì)短小芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的抑制作用超過(guò)氨芐青霉素，并且其

4、中13株對(duì)3種植物病原指示菌均有抗性，顯示了一定的廣譜抗性，在這13株菌中，10株屬于優(yōu)勢(shì)種群。表明釀酒葡萄蘊(yùn)含豐富的內(nèi)生真菌資源，優(yōu)勢(shì)種群經(jīng)過(guò)種間競(jìng)爭(zhēng)，通過(guò)產(chǎn)生多種活性代謝產(chǎn)物增加宿主的抗病害、抗逆能力。 本文在研究釀酒葡萄內(nèi)生真菌發(fā)育關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)一株內(nèi)生真菌屬于蟲草屬真菌，與文獻(xiàn)中報(bào)道的昆蟲內(nèi)生真菌Cotdyceps建立系統(tǒng)發(fā)育樹，表明植物內(nèi)生真菌Cotdyceps與昆蟲內(nèi)生Cotdycops真菌有較大差異，分別形成獨(dú)立的類群

5、，在其發(fā)育史上可能通過(guò)基因調(diào)節(jié)經(jīng)歷了從植物到昆蟲的宿主“跳躍”。菌株A23經(jīng)過(guò)分子鑒定為Pusarium tricinctum(Corda)，本文采用固體培養(yǎng)、有機(jī)溶劑提取、分相萃取、柱層析等分離純化方法從其發(fā)酵產(chǎn)物中分離到5個(gè)純的化合物，經(jīng)過(guò)核磁共振等波譜解析確定其中兩個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)相同，為Enniatin B。測(cè)定其抗植物病原真菌生長(zhǎng)活性，發(fā)現(xiàn)Enniatin B有廣譜抗性，且活性較好，對(duì)黃瓜炭疽病菌MIC為7μg/mL，對(duì)棉花黃萎

6、病菌MIC為3μg/mL，對(duì)棉疫霉果腐病菌MIC為15μg/mL，顯示Enniatin B具有開發(fā)成為農(nóng)用抗生素的潛力。為檢測(cè)葡萄酒是否被對(duì)人類有害的內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物污染，對(duì)采用同一葡萄園收獲果實(shí)釀造的兩種葡萄酒(紅葡萄酒和白葡萄酒)。進(jìn)行高壓液相分析，結(jié)果顯示紅葡萄酒內(nèi)不含Enniatin B，白葡萄酒內(nèi)則含有Enniatin B，濃度達(dá)到11.04μg/mL。表明植物內(nèi)生真菌及其代謝物有可能通過(guò)一定途徑進(jìn)入植物產(chǎn)品，引發(fā)食品安全問(wèn)題