辣椒素預(yù)防吲哚美辛致胃黏膜損傷的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究不同時(shí)期辣椒素(CAP)對(duì)吲哚美辛致胃黏膜損傷的作用及機(jī)制。
　　方法：⑴分組方法:SD大鼠80只，隨機(jī)分為8組，每組10只。實(shí)驗(yàn)分兩期完成，Ⅰ期為2周，Ⅱ期為4周，分別為A1組（空白對(duì)照1組）、A2組（空白對(duì)照2組）、B1組（模型1組）、B2組（模型2組）、C1組（CAP1組）、C2組（CAP2組）、D1（CAP+吲哚美辛1組）、D2組(CAP+吲哚美辛2組)。Ⅰ期:A1組予以生理鹽水10ml/kg/d灌胃，2周后予以

2、生理鹽水10ml/kg灌胃1次;B1組予以生理鹽水10ml/kg/d灌胃，2周后予以吲哚美辛40mg/kg灌胃1次;C1組予以CAP1mg/kg/d灌胃，2周后予以生理鹽水10ml/kg灌胃1次;D1組予以CAP1mg/kg/d灌胃，2周后予以吲哚美辛40mg/kg灌胃1次。Ⅱ期:A2組予以生理鹽水10ml/kg/d灌胃，4周后予以生理鹽水10ml/kg灌胃1次;B2組予以生理鹽水10ml/kg/d灌胃，4周后予以吲哚美辛40mg/kg

3、灌胃1次;C2組予以CAP1 mg/kg/d灌胃，4周后予以生理鹽水10ml/kg灌胃1次;D2組予以CAP1mg/kg/d灌胃，4周后予以吲哚美辛40mg/kg灌胃1次。⑵CAP干預(yù)方法:實(shí)驗(yàn)中于每日上午8時(shí)給予C1組、C2組、D1組、D2組大鼠CAP1mg/kg灌胃1次，結(jié)束后大鼠自由進(jìn)食和飲水。⑶吲哚美辛造模方法:B1組、B2組、D1組、D2組大鼠最后一次灌胃結(jié)束后禁食不禁水24小時(shí)，然后予以吲哚美辛40mg/kg灌胃一次。⑷檢測(cè)

4、指標(biāo)及方法:處死大鼠后，收集胃液采用酸堿滴定法測(cè)定胃酸總酸度，按Guth標(biāo)準(zhǔn)改良評(píng)分[1]進(jìn)行肉眼計(jì)數(shù)胃黏膜損傷指數(shù);將胃竇組織修剪為0.5cm×0.5cm大小，共取4塊，取1塊胃竇組織用于HE染色行組織病理學(xué)觀察并根據(jù)Masuda標(biāo)準(zhǔn)對(duì)胃黏膜病理損傷程度進(jìn)行評(píng)分，并用于免疫組化法檢測(cè)胃黏膜辣椒素受體（TRPV1）、降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）的表達(dá)及積分;取1塊胃竇組織勻漿后按硫代巴比妥酸(TBA)法檢測(cè)胃組織丙二醛(MDA);取1塊

5、胃竇組織勻漿后按氮藍(lán)四唑(NBT)法檢測(cè)胃組織超氧化物歧化酶(SOD);取1塊胃竇組織勻漿后按雙抗體夾心法檢測(cè)胃組織前列環(huán)素(PGI2)水平。
　　結(jié)果：⑴動(dòng)物情況:實(shí)驗(yàn)中各組大鼠精神良好，行動(dòng)靈活，進(jìn)食正常，大小便正常，未出現(xiàn)互相撕咬情況，8組大鼠均無死亡。⑵肉眼下觀察大鼠胃黏膜形態(tài)學(xué)改變及損傷評(píng)分:A1組大鼠胃黏膜呈橘紅色，表面光滑，無充血水腫，未見損傷，未見血性積液;A2組大鼠胃黏膜呈橘紅色，表面光滑，無充血水腫，未見損傷，

6、未見血性積液:B1組大鼠胃黏膜充血、水腫明顯，有大量點(diǎn)狀出血、線狀出血或條狀糜爛灶，胃黏膜表面附著血痂，胃液呈咖啡色，部分可見血性積液;B2組大鼠胃黏膜充血、水腫明顯，有大量點(diǎn)狀出血、線狀出血或條狀糜爛灶，胃黏膜表面附著血痂，胃液呈咖啡色，部分可見血性積液;C1組大鼠胃黏膜呈橘紅色，表面光滑，無充血水腫，未見損傷，未見血性積液;C2組大鼠胃黏膜呈橘紅色，表面光滑，無充血水腫，未見損傷，未見血性積液;D1組大鼠胃黏膜充血水腫，表面附著血痂

7、，可見部分點(diǎn)狀糜爛灶、部分條狀糜爛灶，胃液呈咖啡色;D2組大鼠胃黏膜損傷程度明顯減輕，可見少許出血點(diǎn)及散在點(diǎn)狀糜爛灶，胃液呈淺咖啡色，部分呈咖啡色。胃黏膜損傷評(píng)分分別為A1組:0.0±0.0，A2組:0.0±0.0，B1組:39.90±5.70，B2組:40.15±5.32，C1組:0.0±0.0，C2組:0.0±0.0，D1組:35.5±3.78，D2組:22.5±5.04，其中B1組胃黏膜損傷評(píng)分顯著高于A1組(P＜0.05)、C1

8、組(P＜0.05)，B2組胃黏膜損傷評(píng)分顯著高于A2組(P＜0.05)、C2組(P＜0.05)、D2組(P＜0.05)，D1組胃黏膜損傷評(píng)分顯著高于A1組(P＜0.05)、C1組(P＜0.05)、D2組(P＜0.05)，D2組胃黏膜損傷評(píng)分顯著高于A2組(P＜0.05)、C2組(P＜0.05)。⑶大鼠胃竇黏膜病理組織學(xué)改變及損傷評(píng)分:A1組胃竇黏膜上皮細(xì)胞排列整齊、未見腺體結(jié)構(gòu)紊亂;A2組胃竇黏膜上皮細(xì)胞排列整齊、未見腺體結(jié)構(gòu)紊亂;B1

9、組大鼠胃竇黏膜充血、出血、水腫明顯，上皮細(xì)胞脫落，可見腺體結(jié)構(gòu)紊亂;B2組大鼠胃竇黏膜充血、出血、水腫明顯，上皮細(xì)胞脫落，可見腺體結(jié)構(gòu)紊亂;C1組胃竇黏膜上皮細(xì)胞排列整齊，部分黏膜下血管可見充血，未見腺體結(jié)構(gòu)紊亂;C2組大鼠胃竇黏膜上皮細(xì)胞排列整齊，部分黏膜下血管可見充血，未見腺體結(jié)構(gòu)紊亂;D1組大鼠胃竇黏膜充血、出血、水腫，可見上皮細(xì)胞脫落，部分可見腺體結(jié)構(gòu)紊亂;D2組大鼠胃竇黏膜充血、水腫較B組輕，可見上皮細(xì)胞脫落，未見腺體結(jié)構(gòu)紊亂

10、。大鼠胃竇黏膜病理組織損傷積分分別為A1組:0.0±0.0，A2組:0.0±0.0，B1組:5.50±2.12，B2組:5.45±2.07，C1組:0.0±0.0，C2組:0.0±0.0，D1組:5.20±2.25，D2組:2.13±0.99。其中B1組胃黏膜損傷評(píng)分顯著高于A1組(P＜0.05)、C1組(P＜0.05)，B2組胃黏膜損傷評(píng)分顯著高于A2組(P＜0.05)、C2組(P＜0.05)、D2組(P＜0.05)，D1組胃黏膜損傷

11、評(píng)分顯著高于A1組(P＜0.05)、C1組(P＜0.05)、D2組(P＜0.05)，D2組胃黏膜損傷評(píng)分顯著高于A2組(P＜0.05)、C2組(P＜0.05)。⑷胃酸總酸度(mmol/L):A1組:41.90±1.87，A2組:42.20±1.96，B1組:48.15±1.88，B2組:48.42±1.93，C1組:38.2±2.09，C2組:34.16±2.36， D1組:45.13±2.21, D2組:41.86±2.07。其中A1

12、組胃酸總酸度高于C1組(P＜0.05), A2組胃酸總酸度高于C2組(P＜0.05), B1組胃酸總酸度顯著高于A1組(P＜0.05)、 C1組(P＜0.05)、 D1組(P＜0.05), B2組胃酸總酸度顯著高于A2組(P＜0.05)、 C2組(P＜0.05)、 D2組(P＜0.05), C1組胃酸總酸度顯著高于C2組(P＜0.05), D1組胃酸總酸度顯著高于A1組(P＜0.05)、 C1組(P＜0.05)、 D2組(P＜0.05)

13、, D2組胃酸總酸度顯著高于C2組(P＜0.05)。⑸胃竇組織MDA含量(nmol/mg prot): A1組:1.51±0.07, A2組:1.52±0.08, B1組:3.88±0.17, B2組:3.91±0.21, C1組:1.49±0.06, C2組:1.47±0.08, D1組:3.78±0.19, D2組:2.75±0.23。其中B1組MDA含量顯著高于A1組(P＜0.05)、C1組(P＜0.05), B2組MDA含量顯著

14、高于A2組(P＜0.05)、 C2組(P＜0.05)、D2組(P＜0.05), D1組MDA含量顯著高于A1組(P＜0.05)、 C1組(P＜0.05)、D2組(P＜0.05), D2組MDA含量顯著高于A2組(P＜0.05)、 C2組(P＜0.05）。6.胃竇組織SOD活力(u/mg prot):A1組:151.05±16.76, A2組:150.54±15.85,B1組:100.48±9.69, B2組:101.48±9.85, C

15、1組:148.58±16.82, C2組:155.57±13.18, D1組:113.86±11.63, D2組:123.54±9.93。其中B1組SOD活力顯著低于A1組(P＜0.05)、 C1組(P＜0.05)、 D1組(P＜0.05), B2組SOD活力顯著低于A2組(P＜0.05)、 C2組(P＜0.05)、 D2組(P＜0.05), D1組SOD活力顯著低于A1組(P＜0.05)、 C1組(P＜0.05), D2組SOD活力顯

16、著低于A2組(P＜0.05)、C2組(P＜0.05)。7.胃竇組織PGI2含量(ng/L):A1組:172.16±19.82, A2組:170.72±18.72, B1組:113.74±17.99, B2組:110.95±16.58,C1組:225.14±16.96,C2組:259.49±19.48,D1組:132.55±16.05, D2組:163.11±23.32。其中A1組PGI2含量顯著低于C1組(P＜0.05)，A2組PGI2

17、含量顯著低于C2組(P＜0.05)，B1組PGI2含量顯著低于A1組(P＜0.05)、C1組(P＜0.05)、D1組(P＜0.05)，B2組PGI2含量顯著低于A2組(P＜0.05)、C2組(P＜0.05)、D2組(P＜0.05)，C1組PGI2含量顯著低于C2組(P＜0.05)，D1組PGI2含量顯著低于A1組(P＜0.05)、C1組(P＜0.05)、D2組(P＜0.05)，D2組PGI2含量顯著低于C2組(P＜0.05)。⑹大鼠胃竇

18、黏膜TRPV1、CGRP表達(dá)情況及評(píng)分:大鼠胃竇黏膜內(nèi)TRPV1、CGRP陽性產(chǎn)物在各組中均有表達(dá)，產(chǎn)物主要位于細(xì)胞漿內(nèi)。大鼠胃竇黏膜TRPV1表達(dá)情況:A1組陽性產(chǎn)物顏色可見淺黃色或黃色，分布可見稀疏或中等;A2組陽性產(chǎn)物顏色可見淺黃色或黃色，分布可見稀疏或中等;B1組陽性產(chǎn)物顏色為淺黃色，分布可見稀疏或中等;B2組陽性產(chǎn)物顏色為淺黃色，分布可見稀疏或中等;C1組陽性產(chǎn)物顏色為黃色，分布可見中等或密集，部分分布稀疏;C2組陽性產(chǎn)物顏色

19、可見黃色或棕黃色，分布可見密集或特別密集，部分分布中等;D1組陽性產(chǎn)物顏色可見淺黃色或黃色，分布可見中等或密集，部分分布稀疏;D2組陽性產(chǎn)物顏色可見黃色或棕黃色，分布可見中等或密集，部分特別密集。大鼠胃竇黏膜TRPV1表達(dá)評(píng)分分別為A1組:1.38±0.52，A2組:1.36±0.48，B1組:1.33±0.50，B2組:1.35±0.53，C1組:2.25±0.71，C2組:3.38±0.74，D1組:2.13±0.64，D2組:3.

20、25±0.71。其中A1組TRPV1表達(dá)評(píng)分顯著低于C1組(P＜0.05)、D1組(P＜0.05)，A2組TRPV1表達(dá)評(píng)分顯著低于C2組(P＜0.05)、D2組(P＜0.05)，B1組TRPV1表達(dá)評(píng)分顯著低于C1組(P＜0.05)、D1組(P＜0.05)，B2組TRPV1表達(dá)評(píng)分顯著低于C2組(P＜0.05)、D2組(P＜0.05)，C1組TRPV1表達(dá)評(píng)分顯著低于C2組(P＜0.05)，D1組TRPV1表達(dá)評(píng)分顯著低于D2組(P＜

21、0.05)。⑺大鼠胃竇黏膜CGRP表達(dá)情況:A1組陽性產(chǎn)物顏色為淺黃色，分布可見稀疏或中等;A2組陽性產(chǎn)物顏色為淺黃色，分布可見稀疏或中等;B1組陽性產(chǎn)物顏色為淺黃色，分布可見稀疏或中等;B2組陽性產(chǎn)物顏色為淺黃色，分布可見稀疏或中等;C1組陽性產(chǎn)物顏色可見淺黃色或黃色，分布可見稀疏、中等或密集;C2組陽性產(chǎn)物顏色為黃色，部分可見棕黃色，分布可見中等、密集或特別密集;D1組陽性產(chǎn)物顏色為淺黃色，分布可見稀疏、中等或密集;D2組陽性產(chǎn)物顏

22、色為淺黃色或黃色，部分可見棕黃色，分布可見中等、密集或特別密集。大鼠胃竇黏膜CGRP表達(dá)評(píng)分分別為A1組:1.30±0.76，A2組:1.32±0.75，B1組:1.20±0.42，B2組:1.23±0.45，C1組:2.0±0.67，C2組:3.1±0.74，D1組:1.90±0.74，D2組:2.9±0.73。其中A1組CGRP表達(dá)評(píng)分顯著低于C1組(P＜0.05)、D1組(P＜0.05)，A2組CGRP表達(dá)評(píng)分顯著低于C2組(P＜

23、0.05)、D2組(P＜0.05)，B1組CGRP表達(dá)評(píng)分顯著低于C1組(P＜0.05)、D1組(P＜0.05)，B2組CGRP表達(dá)評(píng)分顯著低于C2組(P＜0.05)、D2組(P＜0.05)，C1組CGRP表達(dá)評(píng)分顯著低于C2組(P＜0.05)，D1組CGRP表達(dá)評(píng)分顯著低于D2組(P＜0.05)。⑻大鼠胃竇黏膜TRPV1與CGRP表達(dá)的相關(guān)性分析:采用pearson相關(guān)性分析法檢測(cè)胃竇黏膜TRPV1與CGRP表達(dá)的相關(guān)性，結(jié)果顯示胃竇

24、黏膜TRPV1與CGRP表達(dá)的相關(guān)系數(shù)為0.998，兩者存在正相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)。
　　結(jié)論：①CAP1mg/kg/d連續(xù)灌胃2周、4周，對(duì)正常大鼠胃黏膜大體形態(tài)、病理組織學(xué)無損傷作用；②預(yù)先給予CAP1mg/kg/d連續(xù)灌胃4周具有預(yù)防吲哚美辛致大鼠胃黏膜損傷的作用；③CAP1mg/kg/d連續(xù)灌胃2周、4周降低大鼠胃酸總酸度；④給予CAP1mg/kg/d連續(xù)灌胃2周、4周增加TRPV1、CGRP在大鼠胃竇黏膜內(nèi)的表達(dá)，增