辣椒素立方液晶納米粒制備及辣椒素抗成纖維細(xì)胞增殖的初步研究.pdf

1、[目的]：
　　1.通過(guò)星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化法優(yōu)化立方液晶納米粒制備工藝，制備辣椒素立方液晶納米粒，制備動(dòng)物創(chuàng)傷模型，觀察辣椒素及辣椒素立方液晶納米粒對(duì)創(chuàng)傷修復(fù)及瘢痕增生抑制效果。
　　2.通過(guò)體外原代培養(yǎng)獲得新生SD大鼠皮膚成纖維細(xì)胞，觀察辣椒素對(duì)成纖維細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及凋亡的影響及可能的分子機(jī)制。
　　[方法]：
　　1.以植烷三醇為液晶材料、泊洛沙姆407(F127)為穩(wěn)定劑，通過(guò)高速剪切和超聲破碎制備

2、立方液晶納米粒，采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法探討超聲參數(shù)（超聲時(shí)間、超聲功率）對(duì)納米粒樣品液溫度、粒徑的影響。
　　2.構(gòu)建SD大鼠背部皮膚創(chuàng)傷模型，觀察辣椒素及辣椒素立方液晶納米粒對(duì)創(chuàng)傷修復(fù)與瘢痕增生抑制效果。
　　3.通過(guò)體外原代培養(yǎng)獲得新生SD大鼠皮膚成纖維細(xì)胞，采用MTT法檢測(cè)不同濃度辣椒素(0.5，1，2，4，8μg/ml)作用24h后，皮膚成纖維細(xì)胞的存活率及IC50，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化;用Hoechst33

3、258染色法觀察細(xì)胞凋亡;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期;AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡;Western blot檢測(cè)FoxO1、P-FoxO1、Akt、P-Akt蛋白表達(dá)改變。
　　[結(jié)果]：
　　1.超聲功率對(duì)立方液晶納米粒溫度、粒徑均有顯著的影響，優(yōu)化工藝條件為使用50.0％超聲功率超聲6.0 min。采用優(yōu)化后的工藝進(jìn)行驗(yàn)證，預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值較接近，表明效應(yīng)面法優(yōu)化的制備工藝預(yù)測(cè)性好。
　　2.動(dòng)

4、物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，辣椒素刺激性強(qiáng)，延緩傷口愈合;辣椒素立方液晶納米粒刺激性明顯減低，動(dòng)物創(chuàng)傷愈合時(shí)間明顯縮短，沒(méi)有明顯的瘢痕，愈合效果較好。
　　3.采用MTT法檢測(cè)及倒置顯微鏡觀測(cè)發(fā)現(xiàn)，隨著辣椒素濃度的增高，細(xì)胞存活率逐漸降低，且呈現(xiàn)濃度依賴性，IC50為3.55μg/ml;流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期結(jié)果顯示，辣椒素可將皮膚成纖維細(xì)胞阻滯在G1期;AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法及Hoechst33258染色結(jié)果顯示，辣椒素處理后，皮膚