IL33、ST2及IL13基因多態(tài)性與湖北地區(qū)日本血吸蟲病的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分 ST2(IL1RL1)基因多態(tài)性與慢性日本血吸蟲病和血清ST2蛋白相關(guān)聯(lián)
　　目的：本研究旨闡明ST2基因多態(tài)性與慢性和晚期日本血吸蟲病的關(guān)聯(lián)性，尋找湖北地區(qū)人群對日本血吸蟲的易感基因和位點，從而為血吸蟲疾病基因靶向的治療和預(yù)防提供理論支持。
　　方法：選取湖北地區(qū)血吸蟲疫區(qū)的947位成人為研究對象，包括339位晚期日本血吸蟲病患者，307位慢性日本血吸蟲患者，301位健康者。同時收集研究對象的全血和血清。從全血中

2、提取DNA后，利用基因多態(tài)性檢測系統(tǒng)檢測ST2基因的6個單核苷酸多態(tài)性位點在人群中的差異。采用ELISA方法檢測868例血清標(biāo)本中的ST2蛋白，其中包括339例晚期日本血吸蟲病患者、293例慢性日本血吸蟲病患者和257位健康者。通過免疫組化技術(shù)檢測15例日本血吸蟲性肝硬化組織和15例來源于血管瘤周圍正常肝組織中ST2的表達(dá)差異性。通過構(gòu)建rs12712135A/T和rs12712135G/C質(zhì)粒，利用雙熒光素酶的報告基因系統(tǒng)檢測rs12

3、712135A/G位點對ST2近端啟動子轉(zhuǎn)錄活性的影響。
　　結(jié)果：通過多因素回歸分析，我們發(fā)現(xiàn)位于ST2基因上的多態(tài)性位點rs10178081 T可以增加患慢性血吸蟲疾病的風(fēng)險(OR,95％CI;1.65,1.02-2.68;p=0.042)，而多態(tài)性位點rs10206753C具有類似的趨勢(OR,95%CI;1.45,0.98-2.15;p=0.059)。晚期血吸蟲病人群血清ST2蛋白水平（Mean±SEM,1.54±0.01

4、）明顯高于慢性血吸蟲病人群（Mean±SEM,1.33±0.01, P<2.2e-16）和健康人群（(Mean±SEM,1.39±0.01, P<2.2e-16）。經(jīng)過多因素回歸分析后，多態(tài)性位點 rs12712135A與血清中 ST2蛋白水平呈強(qiáng)正相關(guān)（P=2.67E-14）,而rs1420101T,、rs6543119T和rs10206753C與血清中ST2蛋白水平呈強(qiáng)負(fù)相關(guān)（P=2.50E-07; P=6.04E-07; P=0.

5、001），并且多態(tài)性位點 rs12712135A、rs1420101T及rs6543119T在晚期血吸蟲病組中的信號（P=1.10E-06,0.0006,0.0007）強(qiáng)于慢性血吸蟲病組（P=1.39E-05,0.078,0.077）和對照組（P=0.0001,0.002,0.013）。ST2基因的單倍體和基因型也明顯與血清中的ST2蛋白水平相關(guān)。組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn)晚期血吸蟲病肝硬化組織中的ST2蛋白表達(dá)水平高于正常的肝組織。雙熒光素酶的報

6、告基因系統(tǒng)檢測顯示rs12712135A和rs12712135G位點對可溶性ST2蛋白表達(dá)水平無明顯的影響。
　　結(jié)論：我們的結(jié)果首次報道ST2基因多態(tài)性在湖北人群中與慢性日本血吸蟲病和血清ST2蛋白相關(guān)，晚期血日本吸蟲病人群血清中的ST2蛋白增高及日本血吸蟲肝硬化組織中ST2表達(dá)強(qiáng)于正常肝組織，ST2蛋白可以作為晚期日本血吸蟲病的生物標(biāo)記物。
　　第二部分 IL33基因多態(tài)性與湖北地區(qū)日本血吸蟲病的關(guān)聯(lián)性研究
　　目

7、的：本研究旨闡明IL33基因多態(tài)性與慢性和晚期日本血吸蟲病的相關(guān)性。
　　方法：我們對所選的IL33多態(tài)性位點在湖北地區(qū)研究人群中進(jìn)行了檢測和連鎖不平衡分析，然后分析了IL33基因多態(tài)性與日本血吸蟲的關(guān)聯(lián)。用ELISA試劑盒檢測了研究人群血清的IL-33水平，并分析了血清中IL33和ST2的相關(guān)性，隨后分析了IL33基因多態(tài)性與血清中IL-33的關(guān)聯(lián)性。使用免疫組化技術(shù)檢測了IL-33在日本血吸蟲性肝硬化和正常肝組織中的表達(dá)水平。

8、
　　結(jié)果：在晚期血吸蟲病組和慢性血吸蟲組比較中，IL33基因多態(tài)性位點rs928413G和rs4742167C與晚期血吸蟲病相關(guān)（OR分別為0.63和0.67，95%CI分別為0.41-0.98和0.44-1.00，p分別為0.04和0.05）。攜帶有位點rs928413G和rs4742167C單體型與日本血吸蟲病相關(guān)。血清中的ST2和IL-33存在相關(guān)性（r=0.116，p=0.021）。IL33基因多態(tài)性位點和位點組成的單體

9、型無關(guān)聯(lián)性，IL-33在日本血吸蟲性肝纖維組織和正常肝組織中的表達(dá)無顯著性差異。
　　結(jié)論：L33基因多態(tài)性位點rs928413G和rs4742167C能夠降低慢性血吸蟲病患者患晚期血吸蟲病的風(fēng)險性，同多態(tài)性位點rs4742167C和rs928413G組成的單體型CG能降低慢性血吸蟲病向晚期演變的風(fēng)險性，單體型 ACCCC（rs2381416A、rs4742167C、rs10975479C、rs1888909C和rs3939286

10、C）和CCCCG（rs4742167C、rs10975479C、rs1888909C、rs3939286C和rs928413G）在患者感染日本血吸蟲后能夠增加發(fā)展為慢性血吸蟲病的風(fēng)險但是降低慢性病情向晚期血吸蟲病進(jìn)展的風(fēng)險性。血清IL-33和ST2的水平呈正相關(guān)，人群血清中ST2隨著IL-33升高而升高。
　　第三部分 IL13基因多態(tài)性與湖北地區(qū)日本血吸蟲病的關(guān)聯(lián)性研究
　　目的：本研究旨在闡明IL13基因多態(tài)性與日本血吸

11、蟲病的關(guān)聯(lián)性以及對IL13轉(zhuǎn)錄活性的影響
　　方法：我們對IL13基因多態(tài)性位點rs1800925和rs20541在湖北地區(qū)日本血吸蟲疫區(qū)人群中進(jìn)行了檢測，并對rs1800925和rs20541與日本血吸蟲病的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行了分析，另外，我們也對IL13多態(tài)性位點與血清IL-33和ST2的關(guān)聯(lián)性也進(jìn)行了分析。使用免疫組化技術(shù)檢測了血吸蟲性肝硬化組織和正常肝組織中的IL-13水平。通過構(gòu)建質(zhì)粒檢測rs1800925對IL13轉(zhuǎn)錄活性的影

12、響。
　　結(jié)果：在晚期血吸蟲病組與慢性血吸蟲病組的比較中，rs1800925T與晚期血吸蟲病存在關(guān)聯(lián)性（OR=1.39，95%CI=1.02-1.91，p=0.03），單體型rs1800925T-rs20541A和單體型rs1800925C-rs20541A均與晚期血吸蟲病存在關(guān)聯(lián)性（頻率分別為0.14和0.188；OR分別為1.46和0.61；p值分別為0.035和0.002）；在晚期血吸蟲病組與健康比較中，rs1800925T

13、與晚期血吸蟲病存在關(guān)聯(lián)性（OR=1.49，95%CI=1.03-2.13，p=0.03），單體型 rs1800925C-rs20541A均與晚期血吸蟲病存在關(guān)聯(lián)性（頻率為0.171，OR為0.65；p值為0.032）。IL13位點的多態(tài)性與血清中ST2和IL-33水平不存在關(guān)聯(lián)性。IL13在晚期血吸蟲病肝硬化組織中的表達(dá)強(qiáng)于正常肝組織。質(zhì)粒PGL4.17-rs1800925T在293FT、QSG77-1和 HL-7702細(xì)胞系中相對熒光