IL-1β基因多態(tài)性與結(jié)核易感性的相關性研究.pdf

1、結(jié)核病是一種環(huán)境因素和基因因素共同作用的疾病。感染結(jié)核的種種不同臨床表現(xiàn)反映了結(jié)核的致病性與宿主免疫反應之間的平衡。有研究表明，結(jié)核分支桿菌的一種細胞壁成分LAM的作用與革蘭氏陰性菌細胞壁的脂多糖相似，能刺激機體產(chǎn)生多種細胞因子，誘發(fā)機體產(chǎn)生對抗結(jié)核菌的炎癥反應，其中包括白細胞介素-1(interleukin-1，IL-1)，其中IL-1 α、IL-1β是激動劑，與廣泛存在的靶細胞表面IL-1受體結(jié)合，產(chǎn)生生物學效應。IL-1ra是IL

2、-1 α、IL-1 β的拮抗劑，能與IL-1受體競爭性地結(jié)合，占據(jù)位置但不觸發(fā)任何信號，從而發(fā)揮特異性抑制IL-1的活性。IL-1基因包含3個基因，IL-1A、IL-1B、IL-1RN。這三個基因均存在多個位點的突變，形成多個單核苷酸多態(tài)性(SNPs)。本研究以期了解IL-1B基因多態(tài)性與中國人群結(jié)核易感性的關系。 研究方法： 研究對象：對照組來自濟南市中心醫(yī)院健康查體中心，共65例，年齡從18-60歲，其中男29例，女

3、36例。所有對照經(jīng)胸部X線排除結(jié)核病史，無自身免疫病、慢性炎癥等其他疾病。病例組：按國家統(tǒng)一診斷標準選擇山東省胸科醫(yī)院結(jié)核病例，共98例。所有病例經(jīng)痰菌涂片、培養(yǎng)、結(jié)核菌素試驗和X線或CT確診，同時排除相似病癥及自身免疫病、慢性炎癥等其他疾病。 方法： 1.白細胞介素-1B基因多態(tài)性的檢測用基因芯片法和聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)兩種方法對照分析。對照組和病例組每例采集2ml靜脈血加入ED

4、TA抗凝管中，-20℃冰凍保存，備用。 (1)基因芯片法：樣品經(jīng)DNA提取、PCR擴增，然后與芯片在雜交艙中雜交、顯色，然后烘干后，在Baio BE基因芯片檢測儀上進行掃描測定，由軟件自動判斷并輸出結(jié)果。 (2)聚合酶鏈反應一限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析： 用改良碘化鈉法<'[17]>提取DNA。經(jīng)PCR擴增，然后用特異的限制性內(nèi)切酶Ava I消化IL-1B-511基因PCR產(chǎn)物，用特異的限制性內(nèi)切酶A

5、lu I消化基因PCR產(chǎn)物，產(chǎn)生相應的特異性等位基因片段，酶切產(chǎn)物用3％瓊脂糖凝膠電泳，GDs800凝膠成像及分析系統(tǒng)對染色后的凝膠進行照相并保存。 2.白細胞介素-1RN基因多態(tài)性的檢測： 樣品經(jīng)PCR擴增，產(chǎn)物用2％～3％瓊脂糖凝膠電泳檢測(用100bp的ladder)。 結(jié)果： 1、經(jīng)統(tǒng)計分析，IL-1B-511各基因型CC、CT、TT在對照組中和病例組出現(xiàn)的頻率沒有顯著性差異，說明兩組基因型分布沒

6、有不同。等位基因IL-1B-511C和IL-1B-511T在對照組和病例組中的分布沒有顯著不同。IL-1B-511等位基因T在肺結(jié)核組分布頻率高于肺外結(jié)核組。IL-1B-511各基因型CC、CT、TT攜帶者在非空洞肺結(jié)核與空洞肺結(jié)核組出現(xiàn)的頻率比較，兩組比較有顯著性差異，說明兩組基因型分布不同，攜帶TT純合子基因型減少肺結(jié)核空洞形成的風險性。等位基因IL-1B-511C和IL-1B-511T在非空洞肺結(jié)核和空洞肺結(jié)核組分布顯著不同，攜帶

7、T等位基因減少肺結(jié)核空洞形成的風險性。 2、IL-1B-31各基因型CC、CT、TT在對照組中出現(xiàn)的頻率與在病例組中出現(xiàn)的頻率比較，兩組有顯著性差異，攜帶TT純合子基因型增加結(jié)核風險。等位基因IL-1B-31T和IL-1B-31C在對照組和病例組中分布有顯著不同，等位基因IL-1B-31T增加結(jié)核風險。 3、IL-1RN僅發(fā)現(xiàn)三種基因型，各基因型1/1、1/2、2/2攜帶者在對照組中和病例組中出現(xiàn)的頻率比較沒有不同。等位

8、基因IL-1R*1和IL-1RN*2在對照組和病例組中沒有顯著不同。 4、性別與多態(tài)性的關系的研究中發(fā)現(xiàn)，IL-1B-31、IL-IB-511、IL-1三個位點的基因型和等位基因頻率分布在男性與在女性中比較，無論正常組還是對照組差別均無顯著性意義。 5、對IL-1B-31和IL-1B-511進一步作連鎖不平衡分析發(fā)現(xiàn)兩位點之間幾乎不存在連鎖不平衡．說明IL-1各基因型對結(jié)核的危險性可能是獨立的，可能不存在相互關聯(lián)。

9、 6、IL-1B-31、IL-1RN各基因型和等位基因頻率在肺結(jié)核組、肺結(jié)核+肺外結(jié)核組、肺外結(jié)核組中的分布沒有顯著性差異，P>0.05。IL-1B-31、IL-1RN各基因型和等位基因頻率在有空洞形成和無空洞形成肺結(jié)核組中的分布也沒有顯著性差異，P>0.05，說明其多態(tài)性分布對肺結(jié)核患者有無空洞形成沒有影響。 7、 使用基因芯片與使用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性方法做出的結(jié)果一致。 結(jié)論： 1、遺傳因

10、素在結(jié)核病的發(fā)病中有一定的作用，IL-1B-31T、IL-1B-511T基因多態(tài)性的檢測對結(jié)核風險的估計有價值。攜帶IL-1B-31TT純合子基因型增加結(jié)核的風險性；等位基因IL-1B-31T增加結(jié)核風險。IL-1B-511等位基因T增加肺結(jié)核的易感性。IL-1B-511TT純合子基因型減少空洞形成的風險性。等位基因IL-1B-511T減少肺結(jié)核空洞形成的風險性，其余各基因型和等位基因多態(tài)性與結(jié)核易感性、不同部位結(jié)核以及空洞形成無關。

11、 2、IL-1RN有三種基因型，IL-1ra等位基因2和2/2基因型存在增加結(jié)核感染的可能性。 3、檢測IL-1B-31和IL-1B-511以及IL-1RN基因多態(tài)性可用基因芯片的方法，與聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性方法比較，其有很多優(yōu)點?；蛐酒笇?shù)以千記的DNA片段同時進行處理分析的技術，諸如基因組DNA突變譜和mRNA表達譜的檢測等(Trends in Biotectlnology)。 該技術將大量探針分子