IL-1α,IL-1β,IL-18和IL-33基因單核苷酸多態(tài)性及血清水平與系統(tǒng)性硬皮病的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：系統(tǒng)性硬皮病(Systemic sclerosis;scleroderma;SSc)是一種以皮膚和內(nèi)臟纖維化為主要特征的自身免疫性疾病，該病的基本病理變化表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞的損傷導(dǎo)致的彌漫性血管病變，緊接著是免疫系統(tǒng)的活化，輕度的炎癥，以及細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)度表達(dá)引起的組織的纖維化。世界范圍內(nèi)該病的患病率約為7/100萬(wàn)~489/100萬(wàn)，男女患病比約為1:7。該病具體的發(fā)病機(jī)制并不清楚，但是大量的研究認(rèn)為基因因素與環(huán)境因素的交互作用

2、共同導(dǎo)致了該病的發(fā)病。
　　多種自身抗體的產(chǎn)生以及細(xì)胞因子的異常表達(dá)等可導(dǎo)致免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)紊亂，影響著 SSc的發(fā)生。免疫系統(tǒng)細(xì)胞分泌的可溶性的因子如 IL-1α，IL-1β，IL-4，IL-6，IL-13，IL-17，IL-18，IL-33等可能參與SSc的纖維化的調(diào)節(jié)或者是導(dǎo)致血管的損傷，其中IL-1α，IL-1β，IL-18和IL-33屬于IL-1家族細(xì)胞因子的成員，該家族成員還包括IL-1Ra，IL-36α，IL-36β，I

3、L-36γ，IL-36Ra，IL-37和IL-38，本課題組之前的研究指出IL-1家族與SSc存在著潛在的關(guān)聯(lián)。
　　細(xì)胞因子的表達(dá)受其基因水平的調(diào)節(jié)，IL-1家族細(xì)胞因子基因單核苷酸多態(tài)性可能與SSc的發(fā)病相關(guān)。目前已有的研究表明，IL-1A-889C/T(rs1800587)，IL-1B-511C/T(rs16944)，IL-18-607C/A(rs1946518)和IL-18-137G/C(rs187238)以及IL-33

4、rs7044343基因位點(diǎn)與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病遺傳易感性相關(guān)，但是缺少與中國(guó)漢族人群SSc遺傳易感性相關(guān)的報(bào)道。
　　本研究采用病例對(duì)照研究的方法，分別使用TaqMan基因分型方法和ELISA方法檢測(cè)SSc患者及健康對(duì)照者IL-1A，IL-1B，IL-18和IL-33基因位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性和血清表達(dá)水平，分別探討IL-1A，IL-1B，IL-18和IL-33與SSc之間的關(guān)系。
　　研究一、IL-

5、1α，IL-1β，IL-18和IL-33在系統(tǒng)性硬皮病病人外周血中的表達(dá)水平
　　目的：比較SSc患者組和健康對(duì)照組外周血清IL-1α，IL-1β，IL-18和IL-33表達(dá)水平的差異，探討SSc患者血清IL-1α，IL-1β，IL-18和IL-33表達(dá)水平與SSc患者臨床實(shí)驗(yàn)室特征之間的關(guān)聯(lián)性。
　　方法：病例資料來(lái)自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和附屬省立醫(yī)院風(fēng)濕免疫科SSc病人，共收集56例，男性7例女性49例。所有的患者均

6、符合1980年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)關(guān)于本病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。正常對(duì)照來(lái)自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院健康體檢中心，共收集與病例年齡、性別匹配的56例健康體檢者，男性8例女性48例。研究對(duì)象完成知情同意之后，采集外周靜脈血。運(yùn)用ELISA試劑盒分別檢測(cè)IL-1α，IL-1β，IL-18和IL-33的表達(dá)水平。采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)分析病例組和對(duì)照組 IL-1α，IL-1β，IL-18和IL-33的表達(dá)水平是否存在差異。所有檢驗(yàn)均使用SPSS10.01軟件

7、，檢驗(yàn)準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：(1) SSc病例組和對(duì)照組中IL-1α濃度分別為5.24±0.408 pg/ml和4.77±0.332 pg/ml，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.211)。IL-1β，IL-18和IL-33的濃度要明顯高于對(duì)照組(病例組和對(duì)照組IL-1β的表達(dá)水平分別為47.80±1.799 pg/ml和37.98±1.352 pg/ml，IL-18的表達(dá)水平分別為158.2±6.687 pg/ml和132.4±

8、4.363 pg/ml，IL-33的表達(dá)水平分別為43.85±1.250 pg/ml和33.11±1.068 pg/ml)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P值均小于0.05。
　　(2)臨床實(shí)驗(yàn)室特征不同組IL-1α，IL-1β，IL-18和IL-33血清表達(dá)水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，不同特征之間的IL-1α，IL-1β，IL-18和IL-33血清水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值均大于0.05)。
　　結(jié)論：SSc患者組與健康對(duì)照組IL-1α

9、血清中的表達(dá)水平的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而病例組IL-1β，IL-18和IL-33的表達(dá)水平高于健康對(duì)照，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-1α，IL-1β，IL-18和IL-33血清表達(dá)水平與實(shí)驗(yàn)室臨床資料的關(guān)聯(lián)性分析未發(fā)現(xiàn)顯的相關(guān)性。
　　研究二、IL-1α,IL-1β,IL-18和IL-33基因單核苷酸多態(tài)性與系統(tǒng)性硬皮病關(guān)聯(lián)性研究：病例對(duì)照研究和meta分析
　　目的：比較 SSc患者和健康對(duì)照組 IL-1A-889C/T(rs1

10、800587)和IL-1B-511C/T(rs16944)，IL-18-607C/A(rs1946518)和IL-18-137G/C(rs187238)以及 IL-33 rs7044343基因位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率分布的差異，分析 IL-1A-889C/T(rs1800587)和IL-1B-511C/T(rs16944)，IL-18-607C/A(rs1946518)和IL-18-137G/C(rs187238)以及IL-33 rs

11、7044343基因位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與臨床特征關(guān)聯(lián)。
　　方法：本研究納入的病例均來(lái)自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院和附屬省立醫(yī)院風(fēng)濕免疫科的SSc病人，一共收集了58例(女性53例，男性5例)。健康對(duì)照來(lái)自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院健康體檢中心與病例性別和年齡匹配的113例(女性107例，男性6例)。運(yùn)用TaqMan基因分型方法檢測(cè)SSc病例組和健康對(duì)照組IL-1A-889C/T(rs1800587)和IL-1B-511C/T(rs16

12、944)，IL-18-607C/A(rs1946518)和IL-18-137G/C(rs187238)以及IL-33 rs7044343基因位點(diǎn)基因型和等位基因頻率。運(yùn)用meta分析的方法綜合分析IL-1A-889 C/T和IL-1B-511C/T基因的多態(tài)性與SSc之間的關(guān)聯(lián)。
　　使用χ2檢驗(yàn)或確切概率法來(lái)比較分析兩組間基因型和等位基因頻率的差異，所有統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS10.01軟件。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05。
　　結(jié)果

13、：(1)病例組和健康對(duì)照組基因分型的結(jié)果均符合哈迪-溫伯格平衡(P>0.05)。
　　(2) SSc患者組IL-1A-889C/T(rs1800587)基因CC，CT和TT的基因型頻率分別為19.0％,60.3%和20.7%，對(duì)照組為69.0%,25.7%和4.4%，兩組基因型的分布的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。等位基因的比較發(fā)現(xiàn)，IL-1A-889C/T(rs1800587)基因位點(diǎn) T等位基因的頻率分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（T versus

14、 C，OR=2.345,95%CI:1.518-3.622，P=0.000)。顯性模型(TT+TC versus CC)基因型的頻率分布的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=4.167,95%CI:2.016-8.612，P=0.000)。IL-18-607C/A(rs1946518)基因位點(diǎn)C等位基因的頻率分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(C versus A，OR:1.665,95%CI:1.060-2.614，P=0.026)，顯性模型(CC+AC ve

15、rsus AA)基因型頻率的分布的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=2.443,95%CI:1.081-5.519，P=0.029)。其它基因頻率分布的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(3)抗核糖核蛋白抗體陽(yáng)性與陰性組IL-1B-511C/T(rs16944)基因位點(diǎn)等位基因C和T的頻率分布的差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.023)。呼吸困難組與未出現(xiàn)該癥狀組IL-18-607C/A(rs1946518)基因CC，CA和AA分布頻率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

16、意義(P=0.037)，同時(shí)與IL-33 rs7044343基因位點(diǎn)等位基因C和T的分布頻率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.042);血尿的陽(yáng)性率與IL-18-607C/A(rs1946518)基因等位基因 C和A存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(P=0.039)。血沉的升高與 IL-18-137G/C(rs187238)基因的基因型和等位基因均存在關(guān)聯(lián)(P值分別等于0.019和0.006)。
　　(4) meta分析結(jié)果顯示IL-1A-889C/T

17、基因多態(tài)性與SSc發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)性研究，OR值合并結(jié)果顯示，病例和對(duì)照中基因頻率的分布不存在明顯的差異性。2篇共納入320例病例和934例健康對(duì)照的文獻(xiàn)探討了IL-1B-511C/T與SSc之間的關(guān)聯(lián)，基因型 CC versus TT表現(xiàn)出明顯的差異(OR=1.675,95%CI:1.029-2.726，P=0.038)，同樣地等位基因 C versus T也表現(xiàn)出明顯的差異(OR=1.354,95%CI:1.051-1.745，P=0

18、.019)。
　　結(jié)論：本研究第一次報(bào)道了中國(guó)漢族人群中IL-1A-889C/T(rs1800587)和IL-1B-511C/T(rs16944)基因位點(diǎn)與 SSc發(fā)病易感性之間的關(guān)聯(lián)，同時(shí)第一次報(bào)道了IL-18-607C/A(rs1946518)和IL-18-137G/C(rs187238)以及IL-33 rs7044343基因位點(diǎn)與SSc發(fā)病易感性之間的關(guān)聯(lián)。IL-1A rs1800587 T等位基因和IL-18 rs1946