CRT促進DC疫苗抗腫瘤特異性免疫應答研究.pdf

1、目的：鈣網蛋白（Calreticulin，CRT）是哺乳動物體內一種高度保守、分子量大小為46 kDa的Ca2+結合蛋白。蒽環(huán)類化學藥物誘導的腫瘤細胞凋亡，伴隨CRT膜外側向移動定位，誘使吞噬細胞主動清除凋亡的腫瘤細胞，本課題的研究目的即探討CRT提高致敏DC的抗原呈遞能力，誘導機體抗腫瘤特異性免疫應答的可能機制。為DC疫苗的研究提供一種新的思路。
　　方法：(1)用PCR技術克隆CRT基因和MUC1基因，分別構建過表達質粒載體p

2、HBAd-U6-CMV-MUC1/CRT和pHBAd-U6-CMV-MUC1。(2)重組腺病毒載體pHBAd-U6-CMV-MUC1/CRT和pHBAd-U6-CMV-MUC1的包裝，收毒及擴增。(3)小鼠原代樹突狀細胞（Dendritic Celll，DC）的提取及其特異性表面分子的檢測。(4)小鼠T淋巴細胞的提取。(5)腺病毒感染的原代DC細胞刺激T淋巴細胞活化的情況。
　　結果：(1)成功構建pHBAd-U6-CMV-MUC

3、1/CRT和pHBAd-U6-CMV-MUC1。(2)成功包裝，擴增腺病毒載體pHBAd-U6-CMV-MUC1/CRT和pHBAd-U6-CMV-MUC1。(3)成功提取小鼠原代DC細胞。(4)證實腺病毒感染的原代DC可以有效刺激T淋巴細胞的活化。
　　結論：利用腺病毒向胞內遞送MUC1-CRT致敏DC，通過體外細胞實驗證實CRT-MUC1可成功致敏DC，并提高了機體誘導產生抗腫瘤特異性免疫應答的能力，為抗腫瘤DC疫苗的研制提供