Prokineticin2調(diào)控膀胱功能和感覺及其相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分大鼠膀胱測(cè)壓模型的建立及約束狀態(tài)對(duì)大鼠膀胱功能的影響
　　目的：構(gòu)建實(shí)現(xiàn)清醒狀態(tài)下大鼠尿流動(dòng)力學(xué)測(cè)定的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停@取正常大鼠尿動(dòng)力學(xué)參數(shù)，并探索約束狀態(tài)對(duì)大鼠尿動(dòng)力學(xué)參數(shù)的可能影響。
　　方法：24只正常成年SD雌性大鼠，利用外科手術(shù)的方法進(jìn)行大鼠膀胱內(nèi)置管，并經(jīng)皮下隧道引出固定。術(shù)后第8天，經(jīng)微量輸液泵連續(xù)性膀胱內(nèi)灌注生理鹽水，并行連續(xù)性膀胱測(cè)壓和排尿量同步記錄。同一大鼠先后接受約束狀態(tài)下和自由活動(dòng)狀態(tài)下尿流動(dòng)力學(xué)

2、檢查，并分別記錄膀胱測(cè)壓過程中出現(xiàn)的技術(shù)性故障。比較分析大鼠最大膀胱壓、排尿膀胱壓閾值、基礎(chǔ)膀胱壓、單次排尿量、排尿間歇、最大膀胱容量等尿動(dòng)力學(xué)參數(shù)在約束和自由活動(dòng)狀態(tài)下的差異及檢查過程中技術(shù)性故障發(fā)生率的差異。最后，處死大鼠膀胱取材，常規(guī)切片后HE染色觀察膀胱組織形態(tài)。
　　結(jié)果：24只大鼠均成功置管，其中4只大鼠在術(shù)后8天內(nèi)發(fā)生導(dǎo)管脫出或?qū)Ч芏氯?，剩?0只大鼠均順利進(jìn)行了尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè)。大鼠轉(zhuǎn)移至自由活動(dòng)狀態(tài)后大部分能保持安靜

3、或緩步移動(dòng)，獲得滿意的膀胱內(nèi)壓力曲線圖。相對(duì)于約束狀態(tài)的尿動(dòng)力學(xué)檢查，自由活動(dòng)狀態(tài)下的尿動(dòng)力學(xué)檢查遭遇到更多的技術(shù)性故障且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大鼠在約束和自由活動(dòng)狀態(tài)下各尿動(dòng)力學(xué)參數(shù)（包括最大膀胱壓、排尿膀胱壓閾值、基礎(chǔ)膀胱壓、單次排尿量、最大膀胱容量）行配對(duì)t檢驗(yàn)未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。顯微鏡下觀察置管后第8天的膀胱組織未見水腫、潰瘍、細(xì)胞滲出等炎癥改變。
　　結(jié)論：膀胱置管后經(jīng)適當(dāng)時(shí)間間隔并不產(chǎn)生明顯膀胱組織炎性改變，可作為保留意識(shí)的

4、大鼠膀胱測(cè)壓的常規(guī)通道建立手段。利用本實(shí)驗(yàn)建立的約束狀態(tài)下的清醒大鼠膀胱測(cè)壓模型是一種評(píng)價(jià)膀胱活動(dòng)及功能的可靠和實(shí)用的方法。配合適當(dāng)?shù)墓芾硎侄?，約束狀態(tài)對(duì)大鼠尿動(dòng)力學(xué)參數(shù)無明顯干擾，且能減少技術(shù)性故障的發(fā)生和實(shí)驗(yàn)大鼠的使用。這一尿動(dòng)力學(xué)研究動(dòng)物模型可廣泛用于各種膀胱功能異常的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。
　　第二部分PK2/PKR1調(diào)控膀胱炎大鼠的膀胱功能及感覺
　　目的：探討Prokineticin家族分子在大鼠膀胱中的表達(dá)及在膀胱炎中

5、的可能變化，并探索其在調(diào)控膀胱功能及感覺中的生物學(xué)作用。
　　方法：雌性成年SD大鼠隨機(jī)分為四組：對(duì)照組、4h組、48h組和8d組。4h組和48h組大鼠接受單次環(huán)磷酰胺腹腔注射4小時(shí)和48小時(shí)后處死取材，8d組大鼠在接受多次（每3天一次）環(huán)磷酰胺腹腔注射后第8天處死取材。對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水，4h后處死取材。采用IHC、ELISA、real time RT-PCR、western blot等技術(shù)定位定量分析PKs和PKRs在

6、各組大鼠膀胱中的表達(dá)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較分析。通過膀胱灌注PKRs拮抗劑PKRA，運(yùn)用連續(xù)性尿動(dòng)力學(xué)測(cè)定及Von-Frey痛覺測(cè)試、內(nèi)臟疼痛評(píng)分的方法評(píng)估PK2在調(diào)控膀胱生理病理活動(dòng)及膀胱感覺中的作用。
　　結(jié)果：大體組織炎癥參數(shù)評(píng)價(jià)、形態(tài)學(xué)觀察及炎癥因子IL-1β的定量分析均表明環(huán)磷酰胺腹腔注射能有效建立大鼠膀胱炎癥模型。PK2和PKR1在mRNA和蛋白水平均表達(dá)于正常膀胱組織，但PK1和PKR2在各組大鼠膀胱組織中均未見明顯表達(dá)。

7、ELISA、real time RT-PCR和western blot提示環(huán)磷酰胺腹腔注射明顯上調(diào)PK2和PKR1在各實(shí)驗(yàn)組的大鼠膀胱的表達(dá)。免疫組化表明PKR1主要表達(dá)于膀胱粘膜，而PK2主要彌散性分布于膀胱粘膜固有層，且在膀胱炎中表達(dá)上調(diào)。環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)膀胱炎明顯改變大鼠膀胱功能及感覺，其縮短排尿間期，減少單次排尿容積且誘導(dǎo)大鼠內(nèi)臟和軀體疼痛感覺異常。膀胱灌注PKRs拮抗劑PKRA對(duì)正常大鼠排尿反射活動(dòng)和膀胱疼痛感覺未見明顯影響。在4