Numb調(diào)控胰腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的
　　胰腺癌惡性程度高，5年生存率不足5％。預(yù)后差歸因于其早期易發(fā)生胰周侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。故研究影響胰腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)記物對(duì)揭示胰腺癌惡性生物學(xué)行為至關(guān)重要。本研究旨在探討Numb是否通過(guò)調(diào)控腫瘤相關(guān)基因MDM2和p53，以及介導(dǎo)上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生這兩個(gè)機(jī)制影響胰腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　方法
　　組織水平:免疫組化、免疫印跡及實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)Numb、MDM2、p53以及EMT標(biāo)記蛋白E-cad

2、herin和vimentin在胰腺癌中表達(dá)相關(guān)性及臨床病理學(xué)意義。細(xì)胞水平:轉(zhuǎn)染及化療藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Numb、MDM和p53三者表達(dá)相互作用，以及協(xié)調(diào)表達(dá)對(duì)胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制。同時(shí)構(gòu)建Numb沉默或過(guò)表達(dá)胰腺癌穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，檢測(cè)Numb過(guò)表達(dá)或沉默對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGFβ1和表皮生長(zhǎng)因子EGF誘導(dǎo)胰腺癌EMT發(fā)生的影響。動(dòng)物水平:檢測(cè)Numb沉默和過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系分別對(duì)裸鼠皮下成瘤及腫瘤血行轉(zhuǎn)移的影響。
　　結(jié)果

3、>　　1、Numb、MDM和p53協(xié)調(diào)表達(dá)對(duì)胰腺癌侵襲和遷移的調(diào)控作用:①組織水平，Numb表達(dá)與腫瘤大小、分化程度及臨床UICC分期呈負(fù)相關(guān)。而MDM2和p53分別與腫瘤T及UICC分期呈正相關(guān)。相關(guān)性分析:Numb表達(dá)與MDM2呈負(fù)相關(guān)，兩者均與突變型p53無(wú)關(guān)。同時(shí)，Numb可以作為影響胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立保護(hù)因素，Numb陽(yáng)性表達(dá)結(jié)合MDM2陰性表達(dá)的胰腺癌患者預(yù)后更好。②細(xì)胞分子水平，Numb過(guò)表達(dá)或沉默能夠正性調(diào)控野生型但非

4、突變型p53的表達(dá)。同時(shí)Numb沉默增加野生型Capan-2細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，并伴隨著p53和Caspase-3表達(dá)的顯著下調(diào)。免疫沉淀顯示:Numb與p53可形成共沉淀，并且Numb沉默促進(jìn)了p53的泛素化降解。③Numb過(guò)表達(dá)抑制了PANC-1細(xì)胞侵襲和遷移，這種抑制作用在共轉(zhuǎn)染MDM2siRNA后更加明顯;相反，Numb沉默促進(jìn)了Capan-2細(xì)胞侵襲和遷移，這種促進(jìn)作用在共轉(zhuǎn)染p53siRNA后更加顯著。泛素化降解機(jī)制正是

5、介導(dǎo)Numb-MDM2-p53共同對(duì)胰腺癌細(xì)胞的侵襲和遷移調(diào)控的關(guān)鍵機(jī)制。
　　2、Numb通過(guò)介導(dǎo)TGFβ1和EGF誘導(dǎo)胰腺癌EMT的發(fā)生調(diào)控胰腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移:①組織水平，E-cadherin正常表達(dá)與腫瘤分化程度及術(shù)后肝轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān);vimentin表達(dá)與腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。相關(guān)性分析，Numb與E-cadherin表達(dá)呈正相關(guān)，與vimentin表達(dá)無(wú)關(guān)。同時(shí)Numb陽(yáng)性結(jié)合E-cadherin正常表達(dá)的患者

6、預(yù)后更好。②細(xì)胞水平，成功構(gòu)建Numb過(guò)表達(dá)的PANC-1和Numb沉默的BxPC-3胰腺癌穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。Numb過(guò)表達(dá)能夠抑制TGFβ1誘導(dǎo)PANC-1細(xì)胞EMT的發(fā)生，表現(xiàn)為抑制TGFβ1誘導(dǎo)下EMT樣細(xì)胞形態(tài)改變及細(xì)胞侵襲力的增強(qiáng)，以及抑制TGFβ1誘導(dǎo)下E-cad表達(dá)的下調(diào)和vimentin表達(dá)的上調(diào);Numb沉默能夠促進(jìn)EGF誘導(dǎo)BxPC-1細(xì)胞EMT發(fā)生，表現(xiàn)為促進(jìn)EGF誘導(dǎo)下EMT樣細(xì)胞形態(tài)改變及細(xì)胞侵襲力的增強(qiáng)，以及促進(jìn)E