Numb調控胰腺癌侵襲和轉移及相關機制研究.pdf

1、目的
　　胰腺癌惡性程度高，5年生存率不足5％。預后差歸因于其早期易發(fā)生胰周侵襲和遠處轉移。故研究影響胰腺癌侵襲和轉移的分子標記物對揭示胰腺癌惡性生物學行為至關重要。本研究旨在探討Numb是否通過調控腫瘤相關基因MDM2和p53，以及介導上皮細胞間質轉化(EMT)的發(fā)生這兩個機制影響胰腺癌的侵襲和轉移。
　　方法
　　組織水平:免疫組化、免疫印跡及實時定量PCR檢測Numb、MDM2、p53以及EMT標記蛋白E-cad

2、herin和vimentin在胰腺癌中表達相關性及臨床病理學意義。細胞水平:轉染及化療藥物干預實驗檢測Numb、MDM和p53三者表達相互作用，以及協(xié)調表達對胰腺癌細胞生物學行為的影響及機制。同時構建Numb沉默或過表達胰腺癌穩(wěn)轉細胞系，檢測Numb過表達或沉默對轉化生長因子TGFβ1和表皮生長因子EGF誘導胰腺癌EMT發(fā)生的影響。動物水平:檢測Numb沉默和過表達穩(wěn)轉細胞系分別對裸鼠皮下成瘤及腫瘤血行轉移的影響。
　　結果

3、>　　1、Numb、MDM和p53協(xié)調表達對胰腺癌侵襲和遷移的調控作用:①組織水平，Numb表達與腫瘤大小、分化程度及臨床UICC分期呈負相關。而MDM2和p53分別與腫瘤T及UICC分期呈正相關。相關性分析:Numb表達與MDM2呈負相關，兩者均與突變型p53無關。同時，Numb可以作為影響胰腺癌患者預后的獨立保護因素，Numb陽性表達結合MDM2陰性表達的胰腺癌患者預后更好。②細胞分子水平，Numb過表達或沉默能夠正性調控野生型但非

4、突變型p53的表達。同時Numb沉默增加野生型Capan-2細胞對化療藥物的敏感性，并伴隨著p53和Caspase-3表達的顯著下調。免疫沉淀顯示:Numb與p53可形成共沉淀，并且Numb沉默促進了p53的泛素化降解。③Numb過表達抑制了PANC-1細胞侵襲和遷移，這種抑制作用在共轉染MDM2siRNA后更加明顯;相反，Numb沉默促進了Capan-2細胞侵襲和遷移，這種促進作用在共轉染p53siRNA后更加顯著。泛素化降解機制正是

5、介導Numb-MDM2-p53共同對胰腺癌細胞的侵襲和遷移調控的關鍵機制。
　　2、Numb通過介導TGFβ1和EGF誘導胰腺癌EMT的發(fā)生調控胰腺癌的侵襲和轉移:①組織水平，E-cadherin正常表達與腫瘤分化程度及術后肝轉移呈負相關;vimentin表達與腫瘤分化程度和淋巴結轉移呈正相關。相關性分析，Numb與E-cadherin表達呈正相關，與vimentin表達無關。同時Numb陽性結合E-cadherin正常表達的患者

6、預后更好。②細胞水平，成功構建Numb過表達的PANC-1和Numb沉默的BxPC-3胰腺癌穩(wěn)轉細胞系。Numb過表達能夠抑制TGFβ1誘導PANC-1細胞EMT的發(fā)生，表現(xiàn)為抑制TGFβ1誘導下EMT樣細胞形態(tài)改變及細胞侵襲力的增強，以及抑制TGFβ1誘導下E-cad表達的下調和vimentin表達的上調;Numb沉默能夠促進EGF誘導BxPC-1細胞EMT發(fā)生，表現(xiàn)為促進EGF誘導下EMT樣細胞形態(tài)改變及細胞侵襲力的增強，以及促進E