microRNA-33調(diào)控THP-1巨噬細胞炎癥應答及其相關(guān)機制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、MicroRNAs(miRNAs)是一類內(nèi)源性非編碼的小RNA分子,由18~25個核苷酸組成。它通過特異性堿基配對方式結(jié)合到靶基因mRNA的3'UTR(untranslated region),從而誘導靶基因mRNA降解或抑制其翻譯,在轉(zhuǎn)錄后水平來調(diào)控基因的表達。先前的研究表明,miR-33a可以通過靶向結(jié)合ABCA1,沉默其表達,抑制apoA-Ⅰ介導的膽固醇流出。然而,miR-33是否可以負性調(diào)控脂多糖(lipopolysacchar

2、ide,LPS)誘導的THP-1巨噬細胞炎癥反應尚知之甚少,仍有待研究。基于以上研究背景,我們以LPS刺激THP-1巨噬細胞建立炎癥模型,首次研究了miR-33在調(diào)控炎癥反應中所起的作用,旨在闡明:
  1.miR-33是否參與調(diào)控THP-1巨噬細胞的炎癥應答;
  2.探討miR-33參與調(diào)控THP-1巨噬細胞炎癥應答的機制。
  第一部分miR-33抑制巨噬細胞炎癥反應
  首先,我們檢測 LPS誘導活化的T

3、HP-1巨噬細胞炎癥應答中miR-33表達的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),LPS誘導 THP-1巨噬細胞活化后,miR-33的表達顯著上調(diào)。隨著LPS濃度的增加,其miR-33的表達逐漸增加,說明其效應具有LPS的濃度依賴性,并且在10 ng/ml LPS作用時變化最為顯著。隨后,我們將成熟 miR-33模擬物(miR-33 mimics)和miR-33阻遏物(miR-33 inhibitor)分別導入THP-1巨噬細胞細胞內(nèi),人為上調(diào)或下調(diào)細胞內(nèi)m

4、iR-33的表達水平,進而觀察細胞炎癥因子分泌情況的變化。實驗結(jié)果表明,miR-33可以負性調(diào)控LPS誘導活化的THP-1巨噬細胞炎癥應答。
  第二部分miR-33通過靶向作用于NRIP1抑制巨噬細胞炎癥應答
  但是,miR-33是通過與哪些靶基因mRNA的3'UTR相結(jié)合,并負向調(diào)控 THP-1巨噬細胞炎癥介質(zhì)表達的機制還不明確。我們通過Targetscan和MiRDB等 microRNAs靶向預測軟件發(fā)現(xiàn) NRIP1

5、的3'UTR區(qū)含有miR-33的結(jié)合位點。NRIP1作為一種轉(zhuǎn)錄輔抑制因子,通過激活核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信號通路,從而調(diào)控炎癥因子的表達。因此,我們擬選取 NRIP1作為研究的切入點,來探討miR-33對LPS刺激的THP-1巨噬細胞炎癥應答的調(diào)控機制。
  通過雙熒光素酶報告基因技術(shù)發(fā)現(xiàn):miR-33可以有效的抑制NRIP1的3'UTR結(jié)合序列的報告基因質(zhì)粒的熒光素酶活性。此外,

6、我們用RT-PCR及免疫印跡(western blot)方法檢測了轉(zhuǎn)染miR-33 mimics后內(nèi)源性NRIP1的mRNA水平和蛋白水平表達被顯著抑制。由此我們可以得出結(jié)論,miR-33通過與 NRIP1的3'UTR相互作用,從而抑制其蛋白的表達,最終抑制NRIP1信號通路的活化。
  結(jié)論:
  1. miR-33抑制LPS誘導的THP-1巨噬細胞炎性因子分泌,負性調(diào)控THP-1巨噬細胞的炎癥應答;
  2. mi

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