宿主對(duì)泡沫病毒轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、泡沫病毒屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科泡沫病毒亞科，在宿主體內(nèi)處于長(zhǎng)期潛伏感染狀態(tài)，至今還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)該病毒導(dǎo)致宿主的任何臨床癥狀，而其潛伏機(jī)制目前尚不清楚。曾有報(bào)道提出表達(dá)早幼粒細(xì)胞白血病蛋白(PML)能夠抑制人泡沫病毒(PFV)復(fù)制，但隨后的研究卻表明，PML與PFV處于潛伏狀態(tài)無(wú)關(guān)。泡沫病毒的潛伏感染可能牽扯到許多因子，是多種因素相互作用的結(jié)果。
　　 本文利用酵母雙雜交系統(tǒng)，從人B細(xì)胞cDNA文庫(kù)中篩選與PFV Bell相互作用的細(xì)胞蛋白

2、，探討PFV病毒與宿主細(xì)胞的相互作用，尋找抑制Bell反式激活以使PFV處于潛伏感染的細(xì)胞蛋白。篩選發(fā)現(xiàn)了15個(gè)與Bell相互作用蛋白（包括α-Enolase、nuclear LIM interator、HSP27、interferon-induced protein35、importin alpha1等），涉及信號(hào)調(diào)節(jié)、蛋白折疊包裝、蛋白運(yùn)輸、病毒調(diào)控和細(xì)胞代謝等方面。該結(jié)果暗示Bell蛋白可能與宿主細(xì)胞的信號(hào)調(diào)控、蛋白折疊包裝、蛋白

3、運(yùn)輸?shù)榷喾N生物途徑相關(guān)，為今后PFV的研究提供了方向。
　　 選取Enolase蛋白進(jìn)行深入的研究，利用免疫共沉淀技術(shù)驗(yàn)證了它與Bell之間的相互作用，并界定了兩個(gè)蛋白的結(jié)合區(qū)域。實(shí)驗(yàn)證明Enolase抑制Bell介導(dǎo)的IP和LTR轉(zhuǎn)錄激活，而且Enolase與Bell的結(jié)合是Enolase行使抑制功能所必需的。Enolase具有抑制PFV轉(zhuǎn)錄激活的能力，暗示Enolase可能是使病毒處于潛伏感染的重要調(diào)控蛋白。另外本研究揭示了

4、Enolase蛋白的新功能——抑制病毒轉(zhuǎn)錄激活，將Enolase蛋白的功能從原來(lái)的酶學(xué)領(lǐng)域擴(kuò)展至病毒領(lǐng)域。
　　 對(duì)篩選到的NLI(nuclear LIM interactor)蛋白與Bell的相互作用進(jìn)行了確認(rèn)，并進(jìn)行了蛋白的細(xì)胞定位分析。文獻(xiàn)報(bào)道NLI是轉(zhuǎn)錄激活調(diào)控蛋白，該蛋白具有激活和抑制轉(zhuǎn)錄調(diào)控的雙重功能，因此NLI與Bell的相互作用可能會(huì)影響B(tài)ell的空間結(jié)構(gòu)，從而影響病毒的轉(zhuǎn)錄激活。本研究為探討宿主對(duì)PFV轉(zhuǎn)錄調(diào)控

5、影響提供了新的素材。
　　 由于泡沫病毒具有獨(dú)特的LTR、IP雙啟動(dòng)子，專家認(rèn)為該病毒存在IP先于LTR啟動(dòng)的時(shí)序調(diào)控模型，但目前還缺乏足夠的證據(jù)支持這一模型。為了探討病毒時(shí)序調(diào)控模型的機(jī)制，本文研究了宿主轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子AP1對(duì)BFV IP和LTR啟動(dòng)子的影響，結(jié)果表明IP能夠響應(yīng)AP1的激活，LTR卻不能，本文精確定位了AP1應(yīng)答元件的位點(diǎn)，驗(yàn)證了其蛋白結(jié)合能力，并證明AP1能提高Btas蛋白以及病毒的表達(dá)水平。該研究表明由于A