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文檔簡介
1、目的:糖尿病胃輕癱(DGP)是一種繼發(fā)于糖尿病(DM)基礎上,以惡心、發(fā)作性嘔吐、厭食、早飽感及餐后腹脹為主要臨床表現;在排除胃機械性梗阻的條件下出現胃擴張、胃蠕動減慢和胃排空延遲[1],是糖尿病患者常見的一種并發(fā)癥,嚴重危害患者的身體健康。據報道糖尿病患者DGP發(fā)病率高達30%-50%[2-4]。近年來國內外對糖尿病胃輕癱發(fā)病機制的報道眾多,主要是與神經病變、高血糖、胃腸激素紊亂、Cajal間質細胞(ICC)病變、微血管病變、胃腸平滑
2、肌病變等因素有關。
近年來研究發(fā)現胃腸平滑肌病變在糖尿病胃輕癱的發(fā)生發(fā)展中起到非常重要的作用。胃腸道平滑肌是胃腸道動力的核心單位,各種因素最終都要通過胃腸道平滑肌來發(fā)揮調控胃腸道動力的作用。目前認為糖尿病胃輕癱大鼠中存在胃電-機械失偶聯的現象即提示DGP大鼠胃竇平滑肌本身可能存在異常。RhoA/ROCK信號通路是一種Ca2+非依賴性的平滑肌收縮調節(jié)機制,其主要的效應分子還包括肌球蛋白輕鏈磷酸酶(MLCP)、肌球蛋白輕鏈激酶(M
3、LCK)及磷酸化的肌球蛋白輕鏈(p-MLC)等,該信號通路激活后可以調節(jié)平滑肌的收縮。目前發(fā)現其與血管平滑肌、膀胱平滑肌、子宮平滑肌等的異常收縮有密切關系,研究[5]發(fā)現RhoA/ROCK的過表達可以加重糖尿病心肌病,引起血管平滑肌收縮異常,可以參與血管內皮細胞收縮,增強內皮細胞通透性[6]。但是RhoA/ROCK信號通路與胃平滑肌關系及其是否參與DGP的發(fā)病目前尚不清楚。本實驗旨在觀察活血化瘀通絡中藥對糖尿病胃輕癱大鼠胃排空率及胃平滑
4、肌病變及對RhoA/ROCK信號通路的影響,探討其治療DGP可能作用機制,為臨床治療糖尿病胃輕癱提供理論依據。
方法:清潔級健康雄性(Sprague Dawley) SD大鼠30只,體重為201-205g,適應性飼養(yǎng)大鼠2周后按體重隨機分正常組、模型組和中藥組,中藥組干預的藥物是由丹參、水蛭、地龍、川芎等中藥組成。于正常組和模型組大鼠的腹腔給予注射鏈脲佐菌素(STZ)25 mg/kg,注射前STZ的使用按照1%比例用檸檬酸緩沖
5、液(pH4,0.1 mmol/L)進行稀釋。注射STZ后的72 h及1wk時,于大鼠的尾靜脈處進行采血,只有大鼠的隨機血糖不低于16.7 mmol/L時,方能確定動物造模成功。確定造模成功后,用生理鹽水對正常組和模型組的大鼠進行灌胃,中藥組予活血化瘀通絡中藥灌胃,灌藥的比例為10ml/(kg·d);每天灌胃一次,共進行6周。于第6周末時候,給予大鼠酚紅溶液灌胃,15分鐘后按2ml/kg體重腹腔注射8%異戊巴比妥鈉麻醉,然后剖開大鼠腹腔,
6、結扎大鼠賁門及幽門,取出整個胃部,用來檢測胃排空率;留取部分胃組織,置于4%多聚甲醛固定液中,蘇木素伊紅(HE)染色法觀察大鼠胃組織的形態(tài)學改變;部分胃組織于液氮速凍后置于-80℃低溫冰箱內保存,RT-PCR法檢測大鼠胃組織中RhoA、ROCK1、ROCK2的基因表達情況,蛋白印跡(Western blot)法檢測胃組織中p-MLC的蛋白表達。
結果:
1、大鼠一般狀況比較
正常組大鼠的飲食正常,營養(yǎng)狀況良
7、好,反應敏捷,毛色有光澤,體重逐漸增加;其他兩組的大鼠的表現出多飲、多食、多尿癥狀,營養(yǎng)狀況較差,反應遲鈍,精神不振,毛色無光澤,且模型組死亡2只大鼠。但是中藥組大鼠的一般狀況比模型組大鼠較好,飲食、營養(yǎng)及反應都尚可。
2、各組大鼠血糖及體質量的比較
實驗結束后,與正常組相比,模型組、中藥組大鼠的體質量明顯下降(P<0.05);與模型組相比,中藥組大鼠的體質量明顯增加(P<0.05)。與正常組相比,模型組、中藥組大鼠
8、的血糖值明顯增加(P<0.05);與模型組相比,中藥組大鼠的血糖值明顯下降(P<0.05)。
3、各組大鼠胃排空率的比較
實驗結束后,與正常組相比,模型組、中藥組大鼠的胃排空率明顯下降(P<0.05);與模型組相比,中藥組大鼠的胃排空率明顯增強(P<0.05)。
4、HE染色結果
正常組大鼠的胃粘膜層次結構清楚,腺體排列整齊,血管豐富,平滑肌細胞呈梭形,細胞核規(guī)則,細胞核膜平滑,細胞密體明顯,未見
9、細胞空泡;與正常組相比,模型組大鼠的胃粘膜層次結構欠清,腺體排列紊亂,血管數量減少,平滑肌細胞變小,部分細胞凹陷,胞核不規(guī)則,細胞核褶皺,細胞密體減少,出現空泡樣變性,基底膜增厚;中藥干預組大鼠的胃粘膜層次結構較清楚,腺體排列較尚齊,血管數量較豐富,平滑肌細胞多呈梭形,細胞核較規(guī)則,細胞密體較明顯,少量細胞空泡,基底膜未增厚。
5、各組大鼠胃組織RhoA mRNA、ROCK1mRNA、ROCK2mRNA的表達
與正常
10、組相比,模型組及中藥組大鼠胃組織中RhoA mRNA的表達水平顯著降低(P<0.05);與模型組相比,中藥組RhoA mRNA的表達升高(P<0.05)。
與正常組相比,模型組及中藥組大鼠胃組織中ROCK1mRNA的表達水平顯著降低(P<0.05);與模型組相比,中藥組ROCK1 mRNA的表達升高(P<0.05)。
與正常組相比,模型組及中藥組大鼠胃組織中ROCK2mRNA的表達水平顯著降低(P<0.05);與模型
11、組相比,中藥組ROCK2 mRNA的表達均升高(P<0.05)。
6、各組大鼠胃組織p-MLC蛋白的表達
與正常組相比,模型組及中藥組大鼠胃組織中p-MLC蛋白的表達水平顯著降低(P<0.05);與模型組相比,中藥組p-MLC蛋白的表達升高(P<0.05)。
結論:
1、糖尿病胃輕癱大鼠存在明顯的胃排空障礙;活血化瘀通絡中藥能改善胃排空率,對糖尿病胃輕癱有良好的治療作用。
2、糖尿病胃輕
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