文昌魚(yú)類(lèi)tachylectin克隆、表達(dá)與抗菌活性.pdf

1、最近，一類(lèi)新型的凝集素tachylectin-related蛋白在從古老的海綿到脊椎動(dòng)物硬骨魚(yú)類(lèi)的很多物種中被鑒定，并且研究發(fā)現(xiàn)其在生物的先天性免疫中發(fā)揮重要作用。但是，關(guān)于文昌魚(yú)的類(lèi)tachylectin卻未見(jiàn)報(bào)道。文昌魚(yú)是現(xiàn)存的與脊椎動(dòng)物原始祖先最接近的頭索動(dòng)物，一直被認(rèn)為是研究脊椎動(dòng)物起源和進(jìn)化的模式動(dòng)物。本文從成體文昌魚(yú)(Branchiostoma belcheri)消化道cDNA文庫(kù)中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)表達(dá)序列標(biāo)簽，經(jīng)鑒定與tachy

2、lectin-related基因的同源性較高，因而進(jìn)一步去克隆具有完整編碼框的tachylectin-related基因(BbTL)，并對(duì)其結(jié)構(gòu)、進(jìn)化、表達(dá)和功能進(jìn)行了研究。 首先，從文昌魚(yú)cDNA文庫(kù)中克隆到全長(zhǎng)為1236bp的BbTL cDNA，其最大開(kāi)放閱讀框編碼305個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)(理論分子量為32kDa)，含有一個(gè)N末端的信號(hào)肽，屬于分泌型蛋白。該cDNA編碼的蛋白(BbTL)包含有tachylectin-relat

3、ed蛋白的典型結(jié)構(gòu)-6個(gè)含有兩個(gè)短的共有序列GXXWXpI(V)XGXLK和WGVNSNDpIY(F)的串聯(lián)重復(fù)。將BbTL同其他taehylectin-related蛋白進(jìn)行序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，BbTL與其他tacitylectin-related蛋白一樣，其核心結(jié)構(gòu)都相當(dāng)保守；BbTL與無(wú)脊椎動(dòng)物如水螅、鱟、海綿和多頭絨泡菌中發(fā)現(xiàn)的tachylectin-related蛋白有更高的同源性，而與脊椎動(dòng)物中的此類(lèi)蛋白同源性低一些

4、。 其次，我們還研究tachylectin-related基因在文昌魚(yú)中的表達(dá)情況。Northern結(jié)果顯示，BbTL的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為一條帶，大小為1200bp左右，與從文昌魚(yú)中克隆的BbTL eDNA的大小基本一致。切片原位雜交分析表明，BbTL在成體組織中呈組織特異性表達(dá)，在肝盲囊和后腸中的表達(dá)量最高。用細(xì)菌內(nèi)毒素LPS處理文昌魚(yú)后，在腸中BbTL，基因表達(dá)水平迅速升高，說(shuō)明BbTL可能和其他tachylectin-relate