變性劑誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子去折疊和重折疊過程各穩(wěn)定構(gòu)象態(tài)的分布和過渡.pdf

1、本文用內(nèi)源熒光光譜和熒光相圖方法，研究了蛋白溶菌酶分子在變性劑誘導(dǎo)的去折疊和重折疊過程中的折疊中間態(tài)和所對應(yīng)的變性劑濃度；以蛋白質(zhì)分子和變性劑分子之間的締和-解離平衡為基礎(chǔ)，建立了一個定量描述變性劑誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)分子去折疊和重折疊過程的理論模型。通過它可以獲得兩個描述蛋白質(zhì)分子去折疊和重折疊過程中各穩(wěn)定構(gòu)象態(tài)之間過渡的特征參數(shù)，一個是蛋白質(zhì)分子從一個穩(wěn)定構(gòu)象態(tài)過渡到另一個穩(wěn)定構(gòu)象態(tài)的熱力學(xué)平衡常數(shù)k，另一個是在此過程中平均每個蛋白質(zhì)分子所

2、涉及的變性劑分子數(shù)目m；并通過這兩個特征參數(shù)，探討了脲和鹽酸胍誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子去折疊和重折疊過程中各穩(wěn)定構(gòu)象態(tài)的分布和過渡。主要結(jié)果如下：
　　 ⑴在脲和鹽酸胍誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子去折疊過程中存在一個折疊中間態(tài)，出現(xiàn)在脲濃度為4.0 mol/L或鹽酸胍濃度為3.0 mol/L時。當(dāng)變性體系中無還原劑存在時，在鹽酸胍誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子重折疊過程中有兩個折疊中間態(tài)，第一折疊中間態(tài)出現(xiàn)在鹽酸胍濃度為5.0 mol/L時，第二折疊

3、中間態(tài)出現(xiàn)在鹽酸胍濃度為2.4mol/L時；當(dāng)變性體系中有還原劑存在時，在鹽酸胍誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子重折疊過程中沒有折疊中間態(tài)，而在脲誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子重折疊過程中存在一個折疊中間態(tài)，出現(xiàn)在脲濃度為4.5 mol/L時。
　　 ⑵在脲誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子去折疊過程中，k1=1.78×10-3 L·mol-1、k2=2.95×10-2L·mol-1，m1=5.14、m2=2.58；在鹽酸胍誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子去折疊過程中，k1=

4、4.16×10-2 L·mol-1、k2=3.64×10-3 L·mol-1，m1=3.41、m2=4.86；在鹽酸胍誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子重折疊過程中，k1=4.98×103 L·mol-1、k2=3.74 L·mol-1、k3=3.26 L·mol-1，m1=5.08、m2=3.71、m3=1.89；在還原鹽酸胍誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子重折疊過程中，k=1.41×10-1 L·mol-1、m=3.69；在還原脲誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子重折疊過

5、程中，k1=7.70×102 L·mol-1、k2=6.49 L·mol-1，m1=5.63、m2=2.03。
　　 ⑶脲誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子去折疊過程中蛋白溶菌酶分子由天然態(tài)過渡到折疊中間態(tài)的過程要難于由折疊中間態(tài)過渡到完全去折疊態(tài)的過程，而鹽酸胍誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子去折疊過程中蛋白溶菌酶分子由天然態(tài)過渡到折疊中間態(tài)的過程要易于它們由折疊中間態(tài)過渡到完全去折疊態(tài)的過程；鹽酸胍誘導(dǎo)的非還原蛋白溶菌酶重折疊過程中蛋白溶菌酶分子由完

6、全去折疊態(tài)過渡到第一折疊中間態(tài)的過程更易于它們由第一折疊中間態(tài)過渡到第二折疊中間態(tài)的過程，而第一折疊中間態(tài)過渡到第二折疊中間態(tài)的過程又較易于由第二折疊中間態(tài)過渡到天然態(tài)的過程。即在鹽酸胍誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶重折疊過程中蛋白溶菌酶分子的重折疊隨著鹽酸胍濃度的降低會越來越難；而還原鹽酸胍誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子的重折疊過程則較易進行，還原脲誘導(dǎo)的蛋白溶菌酶分子重折疊過程中蛋白溶菌酶分子從完全去折疊態(tài)過渡到折疊中間態(tài)的過程要更易于由折疊中間態(tài)過渡到天