HBXIP降低乳腺癌細胞輻射敏感性的研究.pdf

1、目的:乙肝病毒X蛋白連接蛋白(HepatitisBX-interacting protein; HBXIP)在乳腺癌的發(fā)生、生長和轉(zhuǎn)移過程中扮演著重要的角色。本文旨在探究HBXIP對乳腺癌細胞輻射敏感性的影響。
　　方法:(1)在乳腺癌MDA-MB-231細胞中轉(zhuǎn)染pCMV-HBXIP質(zhì)粒或HBXIPsiRNA建立過表達或干擾HBXIP的乳腺癌細胞系。利用MTT和克隆形成實驗探討HBXIP對電離輻射誘導(dǎo)的乳腺癌細胞增殖能力的影響。

2、利用流式細胞術(shù)確定HBXIP對電離輻射誘導(dǎo)的乳腺癌細胞凋亡的影響。利用Western blotting和PCR實驗通過檢測HBXIP在蛋白和mRNA水平的表達確定pCMV-HBXIP質(zhì)粒和HBXIP siRNA的轉(zhuǎn)染效率，確定HBXIP在輻射耐受的乳腺癌細胞和野生型乳腺癌細胞中表達的差異。(2)在乳腺癌MDA-MB-231細胞系中單純轉(zhuǎn)染pCMV-HBXIP質(zhì)?；騂BXIP siRNA建立過表達或干擾HBXIP的乳腺癌細胞系。利用Wes

3、tern blotting和PCR技術(shù)檢測不同HBXIP表達的乳腺癌細胞系中HBXIP、XIAP和NF-κB在蛋白和mRNA水平的表達。在乳腺癌MDA-MB-231細胞系中共轉(zhuǎn)染pCMV-HBXIP質(zhì)粒和NF-κB siRNA，利用Western blotting和PCR技術(shù)檢測不同HBXIP表達的乳腺癌細胞系中HBXIP、XIAP和NF-κB在蛋白和mRNA水平的表達。(3)分別建立單純pCMV-HBXIP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、pCMV-HBXI

4、P質(zhì)粒和NF-κB siRNA共轉(zhuǎn)染、pCMV-HBXIP質(zhì)粒和XIAP siRNA共轉(zhuǎn)染的乳腺癌MDA-MB-231細胞系，經(jīng)γ射線4Gy照射后，利用MTT和克隆形成實驗檢測各組細胞的增殖能力;利用流式細胞術(shù)檢測各組細胞凋亡的細胞數(shù)目;利用Westernblotting和PCR實驗確定各組的轉(zhuǎn)染效率，確定NF-κB和XIAP在輻射耐受的乳腺癌細胞和野生型乳腺癌細胞中表達的差異。(4)利用裸鼠成瘤實驗從體內(nèi)水平探討HBXIP對乳腺癌MD

5、A-MB-231細胞輻射敏感性的影響。
　　結(jié)果:(1) MTT和克隆形成實驗結(jié)果表明HBXIP能夠顯著增強γ射線照射后乳腺癌細胞MDA-MB-231細胞的增殖能力;流式細胞術(shù)實驗結(jié)果表明HBXIP能夠顯著抑制γ射線誘導(dǎo)的乳腺癌細胞凋亡。Western blotting和PCR實驗結(jié)果表明各轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染成功，并且HBXIP在輻射耐受的乳腺癌細胞中的表達量明顯高于野生型乳腺癌細胞。(2)通過Western blotting和PCR實驗

6、結(jié)果表明，經(jīng)γ射線照射后的乳腺癌MDA-MB-231細胞中，HBXIP能夠調(diào)節(jié)NF-κB依賴的XIAP的表達。(3) MTT和克隆形成實驗結(jié)果表明HBXIP通過NF-κB/XIAP信號通路增強照射后乳腺癌MDA-MB-231細胞的增殖能力;流式細胞術(shù)實驗結(jié)果表明HBXIP通過NF-κB/XIAP信號通路抑制γ射線誘導(dǎo)的乳腺癌MDA-MB-231細胞凋亡;Western blotting和PCR實驗結(jié)果表明各轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染成功，并且NF-κB