MicroRNA34a靶向Notch1影響乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素藥物的敏感性.pdf

1、目的：1.研究miR34a對(duì)Notch1的靶向作用;2.通過miR34a過表達(dá)或抑制其表達(dá)來檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素藥物的敏感性。
　　方法：1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miR34a在MCF-7和MCF-7/ADR乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況，進(jìn)一步驗(yàn)證是否與芯片結(jié)果相符。2.使用Lipofectamine2000對(duì)2株細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miR-34a mimics或inhibitor。3.Westemblot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR等方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前

2、后2組細(xì)胞中Notch1蛋白及其mRNA的表達(dá)情況。4.MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)等方法觀察miR34a過表達(dá)或被抑制是否影響乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素藥物的敏感性。5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)新輔助化療的乳腺癌組織標(biāo)本中miR34a和Notch1的表達(dá)情況以及與化療療效的關(guān)系。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果均經(jīng)SPSS16.0軟件統(tǒng)計(jì)。各實(shí)驗(yàn)至少獨(dú)立重復(fù)3次，重復(fù)性好。數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用方差分析。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析

3、。以P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.miR34a在MCF-7/ADR乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)較MCF-7親代細(xì)胞中的表達(dá)顯著下調(diào)，與芯片結(jié)果相符。2.MCF-7/ADR細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-34a mimics后Notch1蛋白及其mRNA的表達(dá)下調(diào);MCF-7細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-34a inhibitor后Notch1蛋白及其mRNA的表達(dá)上調(diào)。3.miR34a過表達(dá)后MCF-7/ADR細(xì)胞對(duì)阿霉素的IC50（半數(shù)抑制量）降低，細(xì)