2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本文以代謝工程的理論為指導,圍繞產核黃素枯草芽孢桿菌的中心碳代謝進行遺傳改造,以減少酸性副產物乙酸的生成,提高碳的轉化率,并構建了一系列的產核黃素枯草芽孢桿菌的基因工程菌,比較系統(tǒng)地研究中心碳代謝的的遺傳改造對枯草芽孢桿菌的核黃素生物合成的影響,得到的主要結果如下: 1.建立產核黃素枯草芽孢桿菌的代謝網絡模型,進行了通量平衡分析和代謝通量分析的對比。發(fā)現枯草芽孢桿菌的核黃素得率最大時,不產生酸性代謝物乙酸、乳酸和丙酮酸等,并預

2、測進一步遺傳改造的靶點。 2.構建了pta基因缺失的產核黃素工程菌,pta基因缺失工程菌與其親株相比,pta基因缺失使得菌體生長緩慢。代謝分析表明,pta基因缺失減少乙酸的生物合成,伴隨著丙酮酸積累。隨后在pta基因缺失工程菌中擴增alsS基因,發(fā)現alsS基因擴增使得枯草芽孢桿菌有能力將丙酮酸導向3-羥基丁酮生物合成途徑,降低丙酮酸的積累,同時改善了菌體的生長,可在0.5%葡萄糖基本培養(yǎng)基積累核黃素54.4 mg/L,比出發(fā)

3、菌株RH33::[pRB63]n提高了85.7%。遺傳改造后代謝通量分析表明,中心碳代謝的遺傳擾動對代謝網絡關鍵節(jié)點的通量分配影響很小,但這些微小變化促進核黃素生物合成途徑通量的改善。 3.研究了gdh基因的擴增對枯草芽孢桿菌核黃素生物合成能力的影響。結果表明:擴增gdh基因使得菌株在0.5%葡萄糖基本培養(yǎng)基積累核黃素37.2 mg/L,比出發(fā)菌株RH33::[pRB63]n提高了29.7%,同時降低酸性副產物生成速率,這表明

4、提高葡萄糖酸支路的通量有利于核黃素的積累。 4.對磷酸葡萄糖異構酶靶點進行遺傳改造,構建pgi基因缺失工程菌。通過對其發(fā)酵和生長的研究得出結論:pgi基因缺失使菌體生長緩慢,利用葡萄糖的能力降低,但當培養(yǎng)基中添加適量酵母抽提物時,可以改善菌體生長和糖的利用,可在0.5%葡萄糖基本培養(yǎng)基積累核黃素35.9 mg/L,比出發(fā)菌株提高了25.1%。 5.6-磷酸葡萄糖節(jié)點的代謝控制分析表明,降低糖酵解的通量能有效地提高磷酸

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