強啟動子枯草芽孢桿菌核黃素操縱子整合型載體的構(gòu)建并在枯草芽孢桿菌中的表達.pdf

1、本論文研究的主要內(nèi)容是以下內(nèi)容： 通過DNA片段原生質(zhì)轉(zhuǎn)化法，用帶有完整 recA 基因的 DNA 片段轉(zhuǎn)化產(chǎn)核黃素菌株 B．subtilis 24(recA4突變株)原生質(zhì)體，恢復了B．subtilis 24的同源重組功能。恢復 recA 基因功能恢復后，菌株的核黃素產(chǎn)量沒有下降(為 1.3g/L)是比較理想的受體菌。 運用基因工程方法構(gòu)建了帶強啟動子SP02和P43及原啟動子P1核黃素操縱子的三個B．subtil

2、is 整合型質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)三個帶核黃素操縱子質(zhì)粒都可以在大腸桿菌中能產(chǎn)一定量的核黃素，核黃素產(chǎn)量P43>P1≈SP02。然后，分別通過整合型質(zhì)粒在 B．subtilis D3染色體上定點(amyE位點)整合和隨機整合研究了帶不同啟動子的核黃素操縱子在 B．subtilis 中的表達情況。定點(amyE位點)整合的轉(zhuǎn)化子中，核黃素產(chǎn)量P1>P43>SP02。通過比較發(fā)現(xiàn)隨機整合的效果要比定點(amyE位點)整合好，通過篩選得到了帶有P43強啟

3、動子核黃素操縱子的高產(chǎn)核黃素菌株，達3.1g/L。 研究了不帶啟動子的 rib 結(jié)構(gòu)基因構(gòu)建的多克隆載體重組子在 E．coli(Top10)中產(chǎn)核黃素的原因。利用PCR方法從 B．subtilis 擴增出只含核黃素操縱子中 ribA結(jié)構(gòu)基因的DNA片段，克隆到E．coli 中發(fā)現(xiàn)該菌株已有一定的核黃素表達量。一方面解釋了帶rib 結(jié)構(gòu)基因的多克隆載體在E． coli (Top10)中產(chǎn)核黃素的原因，另一方面說明了單獨增加，ri