枯草芽孢桿菌

1、內(nèi)生菌在植物體內(nèi)定殖的研究現(xiàn)狀內(nèi)生菌在植物體內(nèi)定殖的研究現(xiàn)狀摘要摘要：檢測內(nèi)生菌在植物體內(nèi)的定殖動態(tài)變化最常規(guī)的方法是抗藥性標(biāo)記法，通過目標(biāo)細(xì)菌的自發(fā)突變或誘變，篩選出抗高濃度抗生素的突變體，再以此標(biāo)記株進(jìn)行回收檢測。常用的抗生素有利福平、鏈霉素等。除了抗藥性標(biāo)記法外，還有免疫學(xué)方法，如酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、熒光抗體技術(shù)、Western印跡法、基因標(biāo)記法、特異性寡核苷酸片段標(biāo)記法等也在植物內(nèi)生菌的檢測中廣泛應(yīng)用。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：內(nèi)

2、生菌定殖熒光標(biāo)記法綠色熒光蛋白（GFP）1內(nèi)生菌定殖簡介內(nèi)生菌定殖簡介1.1內(nèi)生菌的概念內(nèi)生菌的概念內(nèi)生菌(Plantendophyte)是指在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物的各種組織和器官的細(xì)胞間隙或細(xì)胞內(nèi)，不引起植物組織明顯癥狀改變的微生物，這些微生物有細(xì)菌、真菌、放線菌等[1]。可通過組織學(xué)方法或從嚴(yán)格表面消毒的植物組織中分離或從植物組織內(nèi)直接產(chǎn)生擴(kuò)增出微生物DNA的方法來證明其內(nèi)生[2]。植物內(nèi)生細(xì)菌已成為國內(nèi)外的研

3、究熱點，目前已從植物中分離得到植物內(nèi)生細(xì)菌，其中有的對宿主植物起到有利作用，而有的則具有潛在的致病性。研究人員利用多種方法對植物內(nèi)生細(xì)菌的內(nèi)生定殖進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)了內(nèi)生細(xì)菌在植物體內(nèi)的定殖規(guī)律，隨著研究的不斷深入，認(rèn)識的持續(xù)提高，植物內(nèi)生細(xì)菌在生態(tài)型農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用前景將十分廣闊。1.2內(nèi)生菌定殖接種方式內(nèi)生菌定殖接種方式接種枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)或其它內(nèi)生菌等，根據(jù)定殖的情況采用傷根、灌根和葉腋接種法研究內(nèi)生菌在植

4、物體內(nèi)、根表和根際土壤中的定殖動態(tài)[3]。內(nèi)生細(xì)菌一般在植物細(xì)胞間隙或在植物細(xì)胞壁圍城的空間內(nèi)定殖[4]。內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)入宿主植物體內(nèi)包括三個階段即其對植物的吸附、侵入和定熒光標(biāo)記法（FluescentLabeling）利用GFP融合蛋白技術(shù)來進(jìn)行活細(xì)胞定位研究，是目前較為通行的一種方法，主要利用熒光蛋白或熒光蛋白基因作為標(biāo)志物對研究對象進(jìn)行標(biāo)記分析[10]。綠色熒光蛋白（GFP）常用的是來源于發(fā)光水母的一種功能獨特的蛋白質(zhì)，在光鏡下進(jìn)行研

5、究，不需要制樣，沒有非特異性標(biāo)記的影響。GFP經(jīng)激光掃描共聚集顯微鏡激光照射后，可產(chǎn)生一種綠色熒光（如圖1）。利用GFP做為目標(biāo)蛋白[11]，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將其構(gòu)建到載體上，可跟蹤和判斷生物細(xì)胞的分子變化，從而對蛋白質(zhì)進(jìn)行精確定位。該法大致分為三個步驟：一，真核表達(dá)載體的構(gòu)建；二，轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞；三，激光掃描共聚焦顯微鏡觀察[12]。綠色熒光蛋白（GFP）是目前應(yīng)用最廣的蛋白質(zhì)之一，GFP有如下的優(yōu)點：檢測方便，只需激發(fā)光源，不需任何底物