COX-2和SPARC在口腔鱗癌中表達(dá)的研究.pdf

1、口腔頜面-頭頸鱗狀細(xì)胞癌（HNSCC)占成人惡性腫瘤的8％，口腔頜面-頭頸部腫瘤占全身惡性腫瘤的6.6%，而這其中鱗狀細(xì)胞癌又占到55.8%，口腔和下咽部為高發(fā)部位（20.9%），并呈逐年遞增的趨勢(shì)。2015年中國(guó)約有新發(fā)浸潤(rùn)性癌病例數(shù)429.2萬(wàn)，有281.4萬(wàn)癌癥死亡病例，其中，唇、口腔、咽癌年新發(fā)病例4.81萬(wàn)，年死亡病例2.21萬(wàn)。幾乎22%的全球新發(fā)癌癥病例出現(xiàn)在中國(guó)，27%的癌癥死亡病例在中國(guó)。
　　OSCC大多臨近重

2、要的組織器官，使手術(shù)的范圍受到嚴(yán)重的制約，而且由于頭頸頜面組織血管、淋巴管豐富以及舌的頻繁機(jī)械運(yùn)動(dòng)，常發(fā)生早期頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差，死亡率高達(dá)50%，嚴(yán)重威脅著人們的生命健康。盡管腫瘤綜合治療的不斷發(fā)展，口腔鱗癌的治療取得了一定的進(jìn)步，但是近20年，五年生存率沒(méi)有明顯改善。
　　由于口腔頜面-頭頸鱗狀細(xì)胞癌患者總體生存率很低，其發(fā)病相關(guān)的分子機(jī)制尚未明確，關(guān)于它的診斷與治療始終是惡性腫瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。盡管眾多與腫瘤發(fā)生發(fā)展

3、相關(guān)的生物標(biāo)志在多項(xiàng)前瞻性研究和 Meta分析中得到反復(fù)確證，但仍缺乏足夠的證據(jù)支持臨床應(yīng)用，因此，與OSCC/HNSCC發(fā)生發(fā)展相關(guān)的分子標(biāo)志的研究仍需不斷的探索。
　　初步研究顯示，環(huán)氧化酶-2(COX-2)與富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（SPARC）在OSCC/ HNSCC組織中上調(diào)明顯，提示其與OSCC/ HNSCC發(fā)生和發(fā)展可能有相關(guān)性，可能是OSCC/ HNSCC復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和治療指導(dǎo)方面有價(jià)值的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)基因。
　　

4、目的：檢測(cè)SPARC和COX-2基因在口腔鱗狀細(xì)胞癌、癌旁、淋巴結(jié)以及正常組織中的表達(dá)，研究它們?cè)谀[瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的可能作用機(jī)制以及相互關(guān)系；對(duì)SPARC和COX-2的甲基化情況進(jìn)行初步的探討，驗(yàn)證甲基化修飾水平是否能夠調(diào)控SPARC和COX-2在口腔鱗癌中的表達(dá)。
　　方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)免疫印跡、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測(cè)SPARC和COX-2基因在口腔鱗狀細(xì)胞癌、癌旁、淋巴結(jié)以及正常組織中的表達(dá)。甲基化特異性P

5、CR(MSP)檢測(cè)上述樣本中這兩個(gè)基因的甲基化狀態(tài)。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化顯示COX-2在癌組織高表達(dá)，在正常組織中幾乎無(wú)表達(dá)；其表達(dá)含量隨腫瘤分化程度降低而逐漸增高，與腫瘤的臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在明顯正相關(guān)性。COX-2mRNA的表達(dá)量在癌、癌旁、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織標(biāo)本中均高于正常粘膜組織，其中在癌組織的表達(dá)量最高；除Ⅳ區(qū)與Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)組織中COX-2mRNA的表達(dá)量相比不具有統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)意義以外，其余各組間COX-2mRNA的表達(dá)均具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.免疫組化顯示SPARC在正常粘膜和癌旁組織呈現(xiàn)高表達(dá)，在癌組織中呈低表達(dá)或不表達(dá)。其表達(dá)與腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。與正常粘膜組的SPARC mRNA表達(dá)量相比，除癌旁組織和Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義以外，其余各組表達(dá)均低于正常粘膜組織。
　　3.Western blot發(fā)現(xiàn)COX-2和SPARC在正常組織、癌旁組織、口腔鱗癌和淋巴結(jié)組織中

7、有不同程度的表達(dá)，且蛋白表達(dá)水平與二者mRNA表達(dá)趨勢(shì)一致。
　　4. COX-2mRNA和SPARCmRNA的相對(duì)表達(dá)量在口腔癌組織、癌旁組織、頸部Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ區(qū)淋巴結(jié)中表現(xiàn)為顯著的負(fù)相關(guān)性。
　　5.在頭頸鱗癌多個(gè)細(xì)胞系中COX-2的表達(dá)強(qiáng)烈，SPARC表達(dá)沉默或低下，二者表達(dá)趨勢(shì)與所測(cè)癌組織中表達(dá)結(jié)果一致。
　　6.在OSCC組織樣本中，在癌組織，淋巴結(jié)組織中SPARC基因啟動(dòng)子均出現(xiàn)了高甲基化，而COX-

8、2基因啟動(dòng)子則出現(xiàn)非甲基化狀態(tài)。在正常組織中，COX-2基因啟動(dòng)子則出現(xiàn)高甲基化，SPARC基因啟動(dòng)子則表現(xiàn)出了非甲基化狀態(tài)。在癌旁組織中，COX-2和SPARC均表現(xiàn)為非甲基化。
　　7.在頭頸腫瘤Scc-9、Scc-25、Tca8113、HN13多個(gè)細(xì)胞系均發(fā)現(xiàn)SPARC基因啟動(dòng)子區(qū)出現(xiàn)甲基化修飾，而COX-2基因啟動(dòng)子區(qū)無(wú)甲基化條帶。在正常上皮細(xì)胞系hOMK則發(fā)現(xiàn)COX-2甲基化和SPARC非甲基化。
　　8.在舌癌細(xì)

9、胞株中COX-2基因啟動(dòng)子23個(gè)CpG島僅有3~6個(gè)位點(diǎn)出現(xiàn)甲基化，甲基化率不足10%；SPARC的17個(gè)CpG島全部出現(xiàn)甲基化修飾。去甲基化處理后，SPARCmRNA的表達(dá)出現(xiàn)明顯上調(diào)；COX-2mRNA的表達(dá)無(wú)明顯變化，組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　9. COX-2和SPARC蛋白表達(dá)狀態(tài)與啟動(dòng)子區(qū)甲基化均存在著負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論：
　　1、COX-2在口腔鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá)，與臨床TNM分期的密切相關(guān)，可能是口

10、腔鱗狀細(xì)胞癌的促進(jìn)因子。
　　2、SPARC在口腔鱗狀細(xì)胞癌中低表達(dá)，其表達(dá)缺失與臨床TNM分期關(guān)系密切，可能是口腔鱗狀細(xì)胞癌的抑制因子，可以作為口腔鱗狀細(xì)胞癌診斷的分子生物學(xué)標(biāo)志物。
　　3、癌組織中SPARC啟動(dòng)子區(qū)甲基化和COX-2啟動(dòng)子區(qū)去甲基化是引起二者蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)異常的重要原因。
　　4、COX-2和SPARC的表達(dá)沿縱形淋巴鏈呈梯度變化，且它們的表達(dá)存在著負(fù)相關(guān)關(guān)系，二者在OSCC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程