尿路上皮癌轉(zhuǎn)移的臨床特征及相關(guān)microRNA的初步研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 尿路上皮癌轉(zhuǎn)移的臨床研究
　　目的：
　　總結(jié)尿路上皮癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的臨床病理特征，探討影響轉(zhuǎn)移性尿路上皮癌(MUC)患者預(yù)后的因素。
　　方法：
　　收集1997年1月至2015年2月中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院收治的153例MUC患者的病案資料，從三個(gè)方面進(jìn)行分析:
　　1.患者中71例為腎盂及輸尿管癌(UTUC)，82例為膀胱癌(UBC)。比較UTUC和U

2、BC原發(fā)腫瘤、轉(zhuǎn)移灶分布及轉(zhuǎn)移間隔的差異，尋找影響轉(zhuǎn)移間隔的潛在因素。
　　2.對其中接受2個(gè)療程以上化療、隨訪資料完整的50例患者進(jìn)行生存分析，探討預(yù)后相關(guān)因素。
　　3.總結(jié)發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的51例患者的臨床特征，探討影響其生存期的因素。
　　結(jié)果：
　　1.在轉(zhuǎn)移灶分布及臟器轉(zhuǎn)移數(shù)量上，UTUC和UBC沒有明顯差異。兩組中最常見的轉(zhuǎn)移部位均為淋巴結(jié)，其次為肺、骨、肝及腹膜。但是，UTUC的原發(fā)腫瘤更具侵襲性，中位

3、轉(zhuǎn)移間隔也明顯短于UBC（5.8 vs.17.4個(gè)月，P＜0.001）。單因素分析表明，病理分期（pT4 vs.pTa-3，P=0.037）是影響UTUC轉(zhuǎn)移間隔的唯一因素。多因素分析結(jié)果顯示，原發(fā)腫瘤的病理級別是UBC轉(zhuǎn)移間隔的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(HR6.384，95％ CI3.21～12.69，P＜0.001)，而復(fù)發(fā)為UBC轉(zhuǎn)移間隔的獨(dú)立保護(hù)因素(HR0.384,95％ CI0.18～0.82, P=0.014)。
　　2.接受2

4、個(gè)療程以上化療的50例MUC患者中位生存期為17.2個(gè)月，1年生存率為68.0％，2年生存率為24.0％。在單因素分析中，臟器轉(zhuǎn)移（P=0.032）、骨轉(zhuǎn)移（P=0.005）、轉(zhuǎn)移方式（P=0.024）、臟器轉(zhuǎn)移數(shù)（P=0.032）、ECOG評分（P＜0.001）、原發(fā)灶切除(P＜0.001)、化療療程(P＜0.001)均與MUC患者的預(yù)后相關(guān)。多因素分析表明，影響接受2個(gè)療程以上化療的MUC患者生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素為:骨轉(zhuǎn)移(HR2.

5、384，95％CI1.178～4.824，P=0.016)、ECOG評分≥2(HR5.488，95％CI2.249～13.395，P＜0.001）、化療療程＜5(HR2.498，95％CI1.033～6.040，P=0.042)。
　　3.尿路上皮癌患者最常見的骨轉(zhuǎn)移部位為盆骨、肋骨、腰椎及胸椎。患者從診斷原發(fā)腫瘤到骨轉(zhuǎn)移的中位時(shí)間為13.0個(gè)月，從確定骨轉(zhuǎn)移到死亡的中位時(shí)間為8.0個(gè)月。尿路上皮癌骨轉(zhuǎn)移患者的的1年和2年生存率分

6、別為31.4％和9.8％。在單因素分析中，骨轉(zhuǎn)移方式(P=0.018)、原發(fā)腫瘤切除(P=0.010)、ECOG評分（P=0.001）和化療（P=0.028）均與尿路上皮癌骨轉(zhuǎn)移患者的預(yù)后相關(guān)。多因素分析表明，同時(shí)性骨轉(zhuǎn)移(HR2.558，95％ CI1.176-5.556，P=0.018)和ECOG評分≥2(HR3.030，95％ CI1.536-5.988，P=0.001)是影響尿路上皮癌骨轉(zhuǎn)移患者生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　

7、結(jié)論：
　　1.UTUC和UBC具有相似的組織嗜性，但UTUC的原發(fā)腫瘤更具侵襲性，轉(zhuǎn)移間隔亦明顯短于UBC，因此UTUC患者在進(jìn)行根治性手術(shù)時(shí)應(yīng)常規(guī)進(jìn)行腹膜后淋巴結(jié)清掃。病理分期是與UTUC轉(zhuǎn)移間隔相關(guān)的唯一因素，而病理分級及復(fù)發(fā)均為影響UBC轉(zhuǎn)移間隔的獨(dú)立因素。
　　2.對于接受2個(gè)療程以上化療的MUC患者，骨轉(zhuǎn)移、ECOG評分≥2、化療療程＜5是影響預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　3.骨轉(zhuǎn)移方式、原發(fā)腫瘤切除、ECOG

8、評分及化療均與尿路上皮癌骨轉(zhuǎn)移患者的預(yù)后相關(guān)，其中同時(shí)骨轉(zhuǎn)移以及ECOG評分≥2是影響生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　第二部分 尿路上皮癌轉(zhuǎn)移相關(guān)microRNA的初步研究
　　目的：
　　研究尿路上皮癌轉(zhuǎn)移灶和原發(fā)腫瘤中microRNA表達(dá)的差異及miR-146b-5p對轉(zhuǎn)移過程的影響，探討相關(guān)的分子機(jī)制。
　　方法：
　　1.利用microRNA芯片技術(shù)檢測3例尿路上皮癌患者轉(zhuǎn)移灶和原發(fā)腫瘤中microRN

9、A的表達(dá)譜，從中篩選出差異表達(dá)的microRNA。在22對石蠟樣本中用qRT-PCR驗(yàn)證改變倍數(shù)較大的miR-142-3p及miR-146b-5p，并檢測其在膀胱癌細(xì)胞系5637、T24中的表達(dá)水平。
　　2.通過體外轉(zhuǎn)染攜帶miR-146b-5p的慢病毒，上調(diào)膀胱癌細(xì)胞系5637、T24中miR-146b-5p的表達(dá)，并用qRT-PCR驗(yàn)證。劃痕實(shí)驗(yàn)分析miR-146b-5p過表達(dá)對細(xì)胞遷移能力的影響，Transwell實(shí)驗(yàn)分析

10、miR-146b-5p過表達(dá)對細(xì)胞侵襲能力的影響。
　　3.Western Blot檢測轉(zhuǎn)染miR-146b-5p前后膀胱癌細(xì)胞系5637、T24中E-cadherin、Vimentin蛋白的變化。
　　結(jié)果：
　　1.以改變倍數(shù)＞2和P＜0.05為標(biāo)準(zhǔn)，我們發(fā)現(xiàn)尿路上皮癌轉(zhuǎn)移灶中有32種microRNA表達(dá)上調(diào)，有19種microRNA表達(dá)下調(diào)。其中miR-146b-5p上調(diào)明顯，相對于原發(fā)腫瘤改變6.3倍。qRT-

11、PCR結(jié)果顯示，miR-146b-5p在22對石蠟樣本中的表達(dá)情況與芯片一致，在膀胱癌細(xì)胞系5637、T24中均為中等豐度表達(dá)。
　　2.慢病毒感染后，膀胱癌細(xì)胞系5637、T24中的miR-146b-5p表達(dá)水平顯著提高，分別上調(diào)18042倍和60倍。過表達(dá)miR-146b-5p能增強(qiáng)5637細(xì)胞的遷移能力，抑制5637、T24細(xì)胞的侵襲能力。
　　3.5637細(xì)胞系轉(zhuǎn)染前后均未檢測到Vimentin的表達(dá)，T24細(xì)胞系轉(zhuǎn)