人β1，3-N-乙酰氨基葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶基因(β3GnTs)和轉(zhuǎn)錄因子Ets-1表達(dá)相關(guān)性初步研究.pdf

1、目的：β1，3-N-乙酰氨基葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶8(β3GnT8)是本實(shí)驗(yàn)室通過電子克隆得到的一個新型的人類糖基轉(zhuǎn)移酶，通過同源序列比對確定其屬于β3糖基轉(zhuǎn)移酶大家族。有學(xué)者報道，β3GnT2和β3GnT8能夠在體外形成異二聚體，此復(fù)合物的催化活性比兩者各自的酶活性顯著增強(qiáng)，另外研究表明，轉(zhuǎn)錄因子Ets-1可以調(diào)節(jié)一些糖基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)，本文旨在通過研究四種白血病細(xì)胞株β3GnT2、β3GnT4、β3GnT8以及轉(zhuǎn)錄因子Ets-I在ATRA、T

2、PA誘導(dǎo)分化后的表達(dá)變化，進(jìn)而探討它們在白血病中功能相關(guān)性。
　　 方法：1．采用RT-PCR及實(shí)時定量PCR方法從mRNA水平上研究β3GnT2、β3GnT4、β3GnT8及轉(zhuǎn)錄因子Ets-1的表達(dá)變化；2．染色質(zhì)免疫沉淀(CHIP)的方法檢測轉(zhuǎn)錄因子Ets-1對β3GnT2、β3GnT4、β3GnT8基因的表達(dá)調(diào)控；3．免疫熒光檢測β3GnT2、β3GnT8與轉(zhuǎn)錄因子Ets-1在白血病細(xì)胞株K562中的定位表達(dá)。
　　

3、 結(jié)果：1．與對照組比較，四種細(xì)胞株在經(jīng)過ATRA、TPA誘導(dǎo)分化后，β3GnT2、βGnT4、β3GnT8和Ets-1的表達(dá)量均有提高，β3GnT2與β3GnT8基因的表達(dá)變化趨勢一致，且Ets-1的表達(dá)變化規(guī)律和β3GnT2與β3GnT8基因的表達(dá)變化規(guī)律一致；2．從ChIP產(chǎn)物中進(jìn)行目的基因的擴(kuò)增，擴(kuò)增后發(fā)現(xiàn)在K562細(xì)胞株的ChIP產(chǎn)物中均可擴(kuò)增出β3GnT2和β3GnT8基因，而未擴(kuò)增出β3GnT4基因；3．免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)

4、，β3GnT2和β3GnT8在核周和胞漿都有表達(dá)，轉(zhuǎn)錄因子Ets-1只在核上和核周有表達(dá)，CY3標(biāo)記的紅色熒光與FITC標(biāo)記的綠色熒光有重疊，重疊部分呈黃色熒光。
　　 結(jié)論：與對照組相比，加藥后β3GnT2與β3GnT8基因的表達(dá)變化趨勢一致，且Ets-1的表達(dá)變化規(guī)律和β3GnT2與β3GnT8基因的表達(dá)變化規(guī)律一致。染色質(zhì)免疫沉淀以及免疫熒光檢測，證實(shí)轉(zhuǎn)錄因子Ets-1可與糖基轉(zhuǎn)移酶β3GnT2、β3GnT8結(jié)合。因此，轉(zhuǎn)