淫羊藿和巴戟天中藥提取物對(duì)中國恒河猴不同極化條件下原代巨噬細(xì)胞基因表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:
　　探討中藥淫羊藿、巴戟天提取物對(duì)恒河猴單核衍生的巨噬細(xì)胞在不同極化條件下基因表達(dá)的影響，分析這兩種中藥可能的免疫調(diào)節(jié)的作用機(jī)制。
　　方法:
　　密度梯度離心法分離中國恒河猴外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)，采用貼壁法分離出單核細(xì)胞，并以粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激5天以使單核細(xì)胞分化成巨噬細(xì)胞，隨后不加入極化因子形成M0型巨噬細(xì)胞，以干擾素γ(IFN-γ)或地塞米松繼續(xù)培養(yǎng)2天誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極

2、化為M1和M2c表型，同時(shí)分別加入淫羊藿、巴戟天提取物進(jìn)行干預(yù)，隨后提取mRNA并逆轉(zhuǎn)錄后，以實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)CD4、FoxP3、CTLA-4、CCR5、IDO、IL-10、TGF-β等基因表達(dá)量，以GAPDH為參照基因，與空白組進(jìn)行對(duì)比。
　　結(jié)果:
　　與空白對(duì)照組相比，加入巴戟天提取物培養(yǎng)的M0巨噬細(xì)胞基因表達(dá)上調(diào)不明顯;經(jīng)淫羊藿提取物培養(yǎng)的M0巨噬細(xì)胞，CCR5基因表達(dá)量上調(diào)4.21倍，TGF-β上調(diào)7.66倍

3、，而CD4、CTLA-4、FoxP3、IL-10、IDO的基因表達(dá)無明顯變化。經(jīng)淫羊藿提取物刺激的M1型巨噬細(xì)胞，IL-10的表達(dá)量上調(diào)11.83倍，F(xiàn)oxP3上調(diào)4.55倍，IDO、CCR5、CD4、CTLA-4無明顯變化，TGF-β未測(cè)出;而由巴戟天提取物刺激的M1型巨噬細(xì)胞，CTLA-4基因表達(dá)量上調(diào)3.22倍，F(xiàn)oxP3上調(diào)3.69倍，CCR5、CD4、IL-10、IDO均無明顯變化，TGF-β未測(cè)出。經(jīng)淫羊藿提取物培養(yǎng)刺激的M

4、2c型巨噬細(xì)胞，CCR5基因增加5.94倍，TGF-β基因增加3.53倍，CTLA-4、FoxP3、IDO、IL-10等基因無明顯變化，經(jīng)巴戟天提取物刺激的M2c型巨噬細(xì)胞，CCR5基因增加6.43倍，CTLA-4基因增加3.28倍，IL-10基因增加3.76倍，TGF-β基因增加11.05倍，CD4基因增加3.77倍，F(xiàn)oxP3和IDO兩個(gè)基因無明顯變化。
　　結(jié)論:
　　經(jīng)淫羊藿提取物培養(yǎng)的M0型巨噬細(xì)胞，則能夠上調(diào)CC

5、R5和TGF-β的基因表達(dá)，呈現(xiàn)出促炎、促纖維化的作用。經(jīng)淫羊藿和巴戟天提取物培養(yǎng)后，M1型巨噬細(xì)胞能上調(diào)IL-10、FoxP3、CTLA-4等抑炎、抑纖維化基因表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)和組織纖維化，有利于組織結(jié)構(gòu)的維持和保護(hù)。通過淫羊藿和巴戟天提取物培養(yǎng)后，M2c型巨噬細(xì)胞的CCR5、CD4和TGF-β基因表達(dá)大量增加。表現(xiàn)出促炎和促纖維化的免疫調(diào)節(jié)作用。總結(jié)本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，淫羊藿和巴戟天提取物通過對(duì)不同極化條件下的巨噬細(xì)胞基因表達(dá)影響的不同