瑣瑣葡萄提取物對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子及Toll樣受體表達(dá)的影響.pdf

1、目的：分別利用LPS、Poly(I:C)模擬外源性細(xì)菌、病毒感染，探討瑣瑣葡萄提取物多糖(VTP)、黃酮(VTF)和水提原液(VTY)對(duì)RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α，IFN-β的影響及其對(duì)細(xì)胞表面TLR4、TLR3基因表達(dá)的影響。方法：通過對(duì)RAW264.7型細(xì)胞生物學(xué)形態(tài)的觀察，生長曲線的繪制掌握其一般生物學(xué)活性；分別用6.25、12.5、25、50、100、200、400 μg/ml的VTP、VTF和VTY, 0.01、0.1

2、、1、10 μg/ml的LPS，10、25、50、100 μg/ml的Poly(I:C)作用于RAW264.7細(xì)胞，48 h后采用MTT法測(cè)定各組細(xì)胞的OD值并計(jì)算VTP、VTF和VTY的TC50；采用ELISA法測(cè)定LPS和Poly(I:C)最適刺激濃度和VTP、VTF和VTY干預(yù)其分泌細(xì)胞因子的最適干預(yù)濃度；采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)TLR3、TLR4基因表達(dá)情況。結(jié)果：(1)瑣瑣葡萄提取物VTP、VTF和VTY對(duì)

3、RAW264.7細(xì)胞的TC50分別為599.501、1354.285和1546.094 μg/ml；(2)10 μg/ml，24 h作為LPS最適刺激條件誘導(dǎo)炎癥；與LPS模型組比較VTF及VTY所有劑量組對(duì)TNF-α炎癥因子的抑制有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01)，而VTP(6.25、12.5、50μg/ml)組和25μg/ml劑量組對(duì)TNF-α炎癥因子的增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01，P<0.05)；(3)以100 μg/ml 刺激24

4、h作為Poly(I:C)誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生IFN-β的最適條件；與Poly(I:C)模型組相比，VTF(6.25、12.5、25μg/ml)和VTY所有劑量組對(duì)IFN-β的抑制均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而VTP(6.25、12.5、50μg/ml)組對(duì)IFN-β的增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01)(4)與細(xì)胞對(duì)照組比較，不同處理組TLR3和TLR4基因表達(dá)的上調(diào)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與LPS刺激組相比，VTF干