檢測五種小分子化學(xué)物質(zhì)的蛋白芯片技術(shù)研究.pdf

1、免疫芯片是蛋白芯片的一種，芯片上的探針點陣，通過特異性免疫反應(yīng)捕獲樣品中的靶蛋白，然后通過激光掃描系統(tǒng)和軟件進行圖像掃描、分析、結(jié)果定性定量檢測，該技術(shù)具有高通量、自動化、靈敏度高等優(yōu)點。 本論文是以小分子污染物為檢測對象，開展免疫芯片技術(shù)研究，由于小分子多數(shù)不具備兩個以上供抗體結(jié)合的位點，不適用雙抗體夾心法測定，因此，對五種小分子的檢測均采用競爭法。即將小分子先與蛋白質(zhì)偶聯(lián)，然后通過Cy3對蛋白的標記而間接標記小分子，檢測時

2、，利用非標記小分子對標準液中偶聯(lián)物產(chǎn)生競爭強度確定待測物質(zhì)的含量。 該研究成功地將壬基酚、阿特拉津、雌二醇、罌粟堿和氯霉素等五種小分子物質(zhì)與卵清蛋白或牛血清白蛋白進行偶聯(lián)，偶聯(lián)物經(jīng)標記后均能與各自的抗體結(jié)合，同時以水為樣品進行了定性定量檢測。以阿特拉津為代表物，對抗體芯片的制備進行了條件優(yōu)化，結(jié)果表明，當抗體濃度達到0.254mg/mL、封閉液選擇2％OVA或3％BSA、反應(yīng)溫度37℃、樣品稀釋液pH 7.2、抗原抗體反應(yīng)時間