檢測豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體Cap重組蛋白芯片技術(shù)的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文檢測豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體Cap重組蛋白芯片技術(shù)的研究姓名：武嘉男申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：李書華20080620AbstractDevelopmentandApplicationofProteinMicroarraysforDetectingAntibodiestoPorcineCircovirusTypeIIUsingRecombinantCAPProteinAbstractPorcinecir

2、covirus(PCV)isapeploslesssingleminusstrandDNAvirusItisthesmallestvirusthateverfoundPCVisclassifiedintoPCVIandPCVIIbyitsantigenicityandgenomeTherearealotoflaboratorydiagnosticmethodsforvirusantigenandspecificantibodyofPCV

3、II，suchasviralisolation，PCR，EMCandELISAProteinChip。SOcalledProteinMicroarray，isakindofnewtechniquethatcananalysismanytargetsofcreaturesimpleatthesametimeItcannotonlyretainthecharacterofantigen—antibodyresponsebutalsohave

4、thefeatureofhighflux。lowcost。highparallel，miniaturisationandsteepresponsethatchiphasIthasbecometheflewdirectionofanimalloimiadiagnoseInthisstudy，visualrecombinantproteinmicroassayandFITCwinkproteinmicroassayofPCV11werema

5、deandoptimizedTheycoulddetecttheantibodyofPCVIIinswineserumsensitivelyTheCAPwaspurifiedandconcentrated，whichexpressedbyprokaryoticexpressionsystemItWasprintedontothechipascaptureantigentocapturethePCVIIspecificantibodyTh

6、eprocessesinculuded‘(1)ThepreparationofproteinantigenPCVIICAPgenewasamplifiedbyPCR，thePCRproductwasclonedintopMDl8vector，andthenconvertintoEcoliJM109theplasmidsandthevectorpET30awerecutbynucleotiderestrictionenzymeandthe

7、nlinkedbyT4iigaseTherecombinantplasmidswerecheckedbyPCR，nuleotiderestrictionenzymecutreactionandsequencingThepositiverecombinantplasmidsweretransformedintoBL2l(DE3)andinducedbyIPTGUseultrasonicationandotherchemicallysisr

8、eagenttopurifytheinclusionbodyprimarilyLatertheproteinWasfurtherpurifiedbyNiNTAaffinitychromatographymethodFinallyrecombinantproteinsweredialysisedtefoldWesternblottingshowedthattherecombinantproteinshadgoodantigenicity(

9、2)thevisualproteinmicroarrayandoptimizationofconditionsSpottingthecaptureantigenontothechipsubstratewhichWaschemicallymodifiedwithamino；andtheconditionofchippreparation，captureantigenconcentration，andthepercentageofdevel

10、operwereoptimizedFinally，thechip’slineardetectionregionanddetectionintervalwerecheckedbythedetcetionof60blood—serumsamples，andtheconsequencewascomparaedwiththedetectionofusingELISAkit(3)TheFITCmicroarrayandoptimizationof

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