同型半胱氨酸在小鼠高血壓腦出血中的作用及機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行論述：
　　第一部分 高同型半胱氨酸血癥并未增加高血壓小鼠腦出血風(fēng)險
　　目的:心、腦血管疾病已經(jīng)成為我國的第一大死因，中國現(xiàn)有腦卒中至少700萬，腦卒中造成重大健康負擔(dān)。腦出血是腦卒中的常見類型，霍勇等在07年的研究發(fā)現(xiàn)高同型半胱氨酸型高血壓約占我國人群的75％，目前關(guān)于高同型半胱氨酸血癥與缺血性腦卒中關(guān)系的研究較多，但針對出血性卒中的研究相對較少，且存在爭議。因此本研究在動物水平上直接升高血中同型

2、半胱氨酸水平，以觀察同型半胱氨酸對出血性卒中的影響。
　　方法:采用8月齡的雄性C57BL/6小鼠進行實驗。本實驗總共分為四組:第一組為同型半胱氨酸(Hcy)+血管緊張素Ⅱ(AngⅡ);第二組為Hey+AngⅡ+N-硝基-L-精氨酸甲酯基精氨酸(L-NAME)組;第三組為AngⅡ+L-NAME組;第四組為AngⅡ組。AngⅡ用來提升小鼠血壓，L-NAME為精氨酸合酶抑制劑，用于誘導(dǎo)腦出血的發(fā)生。小鼠首先使用含有Hey的水喂養(yǎng)6周，

3、之后后背皮下包埋含有AngⅡ的ALZET微滲透壓泵，同時水中喂養(yǎng)L-NAME。Hey濃度為1.8g/L; AngⅡ的濃度為1000ng/kg/min;L-NAME的濃度為100mg/kg/day。在小鼠出現(xiàn)腦卒中的行為學(xué)現(xiàn)象時將其麻醉處死，部分小鼠行影像學(xué)檢查，取大腦和血清保存。飼養(yǎng)時間總共為18周。通過繪制生存曲線來描述同型半胱氨酸與腦卒中的關(guān)系。同時采用BP-2000測量小鼠血壓;全自動生化分析儀測量小鼠血中Hey濃度;MR監(jiān)測小鼠

4、的出血位點位置;利用HE染色測量小鼠出血面積;利用免疫組化染色計算出血位點血管的平滑肌細胞個數(shù)。
　　結(jié)果:小鼠喂養(yǎng)Hey6周后血清中Hey濃度升高到23.07umol/L，18周后小鼠血清中平均Hey濃度為41.51umol/L;血壓在170-180mmHg之間。各組間小鼠因腦出血死亡的個數(shù)為:Hey+AngⅡ組2只;Hey+AngⅡ+L-NAME組10只;AngⅡ+L-NAME組10只;AngⅡ組0只。Hey+AngⅡ+L-N

5、AME組與AngⅡ+L-NAME組的生存曲線p值為0.162。AngⅡ+Hey+L-NAME組與AngⅡ+L-NAME組沒有差異，提示同型半胱氨酸對腦出血的發(fā)生也沒有促進作用。
　　結(jié)論:結(jié)果顯示高同型半管氨酸對高血壓小鼠腦出血的發(fā)生沒有影響。
　　第二部分 葉酸對H型高血壓小鼠腦出血的影響
　　目的:H型高血壓約占我國成年高血壓患者的75％，高水平的血漿同型半胱氨酸(Hcy)是心腦血管疾病的獨立危險因素。現(xiàn)有研究表明

6、，通過服用葉酸降低同型半胱氨酸水平能夠降低腦卒中的發(fā)病率，但對單純的出血性腦卒中的作用存在爭議。因此，本研究在動物水平上探討葉酸是否能夠降低出血性腦卒中的風(fēng)險。
　　方法:八個月的C57BL/6小鼠分為H型高血壓腦出血組（20只）和H型高血壓腦出血+葉酸組（17只）。在小鼠出現(xiàn)腦卒中行為學(xué)現(xiàn)象時將小鼠處死取血和大腦組織保存并進行HE染色及免疫組化染色確定小鼠的出血位點。18周后將所有小鼠處死，通過SPSS19.0分析小鼠的K-M曲

7、線對比兩組之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:通過行為學(xué)及最終的病理檢測，發(fā)現(xiàn)H型高血壓組10只死于腦出血，H型高血壓+葉酸組13只死于腦出血。經(jīng)過生存曲線對比H型高血壓組和H型高血壓+葉酸組發(fā)現(xiàn)兩組之間沒有差異，p=0.127。
　　結(jié)論:葉酸不能降低H型高血壓小鼠發(fā)生出血性腦卒中的風(fēng)險。
　　第三部分 高血壓小鼠腦出血血管內(nèi)彈性膜的病理結(jié)構(gòu)變化
　　目的:高血壓腦出血是腦卒中的常見類型，盡管其發(fā)病率較缺血性卒中低，但其發(fā)

8、病兇險，預(yù)后較差，目前對高血壓條件下腦血管病理改變并導(dǎo)致出血知之甚少，本研究擬通過高血壓腦出血小鼠模型研究高血壓腦出血血管病變機制。
　　方法:將8個月的雄性C57BL/6小鼠分為兩組，一組高血壓腦出血組，另一組是正常對照組，每組10只。在小鼠出現(xiàn)腦卒中行為學(xué)現(xiàn)象時將小鼠處死并將大腦組織保存，制作石蠟切片。采用HE染色確定出血位點，采用彈力纖維染色觀察出血部位血管的結(jié)構(gòu)及病理變化。
　　結(jié)果:經(jīng)HE染色找出出血位點，在腦出血