Necrostatin-1在小鼠腦出血中的作用及相關機制研究.pdf

1、目的：在小鼠腦出血模型中,研究程序性壞死的特異性抑制劑necrostatin-1對腦出血引起的大腦損傷作用,探討 necrostatin-1對另外兩種程序性細胞死亡方式(凋亡和自噬性細胞死亡)的影響。
　　方法：采用膠原酶IV注入雄性ICR小鼠左側紋狀體建立腦出血(intracerebral hemorrhage, ICH)模型。在術前15 min分別通過單側側腦室給藥,并在傷后不同時間處死。首先利用組織缺損體積(lesion v

2、olume, LV)的方法評估necrostatin-1對ICH后組織損傷的作用;為了進一步驗證腦組織的損傷是否與細胞損傷數(shù)相關,我們采用體視學顯微鏡觀察并計數(shù)各組出血中心區(qū)以及周邊區(qū)PI陽性細胞數(shù)。為了進一步探究necrostatin-1是否對其他兩種程序性死亡方式(凋亡和自噬性細胞死亡)有影響,我們利用免疫印記法分別檢測了凋亡活性相關蛋白(Bcl-2,cleaved caspase-3)和自噬活性相關蛋白(Beclin-1,LC3-

3、II,p62)的表達水平。此外,為了進一步驗證 necrostatin-1對ICH后凋亡和自噬活性的影響,我們也聯(lián)合利用凋亡的抑制劑zVAD及自噬抑制劑3-MA,檢測了cleaved caspase-3和LC3-II的表達。
　　結果：Necrostatin-1能夠減少ICH引起的組織損傷體積和PI陽性細胞數(shù);免疫印跡結果顯示necrostatin-1能夠降低ICH后自噬和凋亡相關蛋白的表達或活性。3-MA可以同時降低ICH后LC