表皮生長(zhǎng)因子受體Ⅲ型突變體（EGFRvⅢ）多克隆抗體的純化及其特異性的初步研究.pdf

1、表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)是一種廣泛分布于人體各組縱細(xì)胞膜上的多功能糖蛋白，EGFR及其配體是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)的一部分，EGFR過(guò)表達(dá)是引起腫瘤細(xì)胞增殖的重要因素。研究表明，EGFR突變體普遍存在于很多惡性腫瘤細(xì)胞表面，其中最常見(jiàn)的是EGFRvⅢ型(the type Ⅲ EGF deletion-mutant receptor)。由于EGFRvⅢ僅存在于癌細(xì)胞表面，因此

2、，EGFRvⅢ成為癌癥治療的理想靶點(diǎn)。 為了研究EGFRvⅢ在治療癌癥方面的功能，本研究將編碼EGFR、EGFRvⅢ全長(zhǎng)的基因以及編碼EGFRvⅢ胞外區(qū)(E33Ⅺ、E34Ⅺ)的序列分別克隆入載體并嘗試進(jìn)行原核表達(dá)及其純化，以制備針對(duì)EGFRvⅢ的特異性多克隆抗體，為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下： 本實(shí)驗(yàn)利用pET30a構(gòu)建了pET30a/EGFR、pET30a/EGFRvⅢ、pET30a/E33Ⅺ、pET30a/

3、E34Ⅺ原核表達(dá)載體，經(jīng)DNA測(cè)序正確后，在菌液起始濃度OD600為0.5，IPTG濃度為1mM，溫度為37℃及誘導(dǎo)時(shí)間為4h條件F，誘導(dǎo)表達(dá)出170kDa、145kDa、19.69kDa和38.94kDa的目的蛋白。隨后利用融合蛋白中自帶的His標(biāo)簽，進(jìn)行融合蛋白純化，證明其正確性，并對(duì)誘導(dǎo)表達(dá)后的蛋白進(jìn)行定量。 利用合成的耦聯(lián)血藍(lán)蛋白的針對(duì)EGFRvⅢ的PEP3短肽進(jìn)行動(dòng)物免疫，制備抗血清。通過(guò)柱上純化的方法從中提取針對(duì)EG