大鼠門靜脈結(jié)扎后肝組織再生過程中自噬現(xiàn)象的變化及意義.pdf

1、目的：肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，肝切除術(shù)是治療肝癌的最有效手段。但術(shù)后剩余肝臟體積(future liver remnant，F(xiàn)LR)不足是造成術(shù)后肝衰竭等嚴重并發(fā)癥的重要因素。研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)正常肝臟術(shù)后剩余肝臟體積(future liver remnant，F(xiàn)LR)/總肝體積(total liver volume，TLV)＜20％、輕度病理肝臟FLR/TLV＜30％、代償性肝硬化FLR/TLV＜40％術(shù)后出現(xiàn)肝功能衰竭的風(fēng)險很大。如何

2、有效增加肝切除術(shù)后剩余肝臟體積(FLR)及儲備功能，提高肝臟腫瘤手術(shù)的安全性，一直是肝臟外科致力解決的問題。目前臨床上常用的方法是在肝切除前實施擬切除側(cè)肝臟的門靜脈栓塞(portal vein embolization，PVE)，它是通過選擇性栓塞門靜脈分支，更改門靜脈血流，使肝臟血流動力學(xué)改變導(dǎo)致非栓塞側(cè)門靜脈血流增加，術(shù)后栓塞側(cè)肝臟萎縮、非栓塞側(cè)肝臟代償性增生，但其具體機制尚不清楚。本研究旨在探討細胞自噬(Autophagy)在大鼠

3、門靜脈結(jié)扎后肝組織再生過程中表達的改變及意義。
　　方法：60只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分成假手術(shù)組和門靜脈結(jié)扎組。通過手術(shù)結(jié)扎大鼠肝門靜脈頭支的方法來建立肝再生模型，分別于術(shù)后12h、24h、48h、72h、168h處死大鼠，取非結(jié)扎側(cè)肝臟組織標本。采用蛋白印跡(Western blot)技術(shù)檢測非結(jié)扎側(cè)肝組織中Beclin1和LC3的表達，同時采用免疫組化(IHC)檢測非結(jié)扎側(cè)肝組織中細胞周期蛋白D1(

4、Cyclin D1)的表達，所有實驗結(jié)果采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：1.大鼠70％門靜脈結(jié)扎后，結(jié)扎側(cè)肝葉呈進行性萎縮，非結(jié)扎側(cè)肝葉逐漸肥大再生。門靜脈結(jié)扎組非結(jié)扎側(cè)肝葉占全肝重量百分比與假手術(shù)組比較術(shù)后12h顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，并且隨著術(shù)后時間延長，這種差異越來越明顯。
　　2.大鼠70％門靜脈結(jié)扎后非結(jié)扎側(cè)肝組織中Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ的表達和Cyclin D1表達

5、與假手術(shù)組比較術(shù)后顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。其中Beclin1于術(shù)后12h開始升高，24h達高峰，隨后24h-168h緩慢下降，168h與對照組無明顯差異;LC3Ⅱ/Ⅰ于術(shù)后12h開始升高，24h達高峰，48h-168h緩慢下降，168h與對照組無明顯差異;Cyclin D1于術(shù)后12h開始升高，24h達高峰，而72h又增強，72h-168h緩慢下降，但仍高于對照組。
　　3.Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ的表達和

6、Cyclin D1表達與門靜脈結(jié)扎后非結(jié)扎側(cè)肝再生密切相關(guān)，門靜脈結(jié)扎后Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ表達與Cyclin D1表達呈正相關(guān)，基本與Cyclin D1同步表達。
　　結(jié)論：大鼠70％門靜脈結(jié)扎后結(jié)扎側(cè)肝臟萎縮而非結(jié)扎側(cè)肝臟再生肥大。再生肝組織中自噬水平明顯升高，并且Cyclin D1表達也明顯升高。自噬可能通過維持肝細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，保證了肝再生的原料和能量供應(yīng);并且自噬通過調(diào)控G1/S期轉(zhuǎn)換關(guān)鍵性細胞周期蛋白Cycli