無水酒精選擇性栓塞肝硬化大鼠門靜脈后肝再生的實驗研究.pdf

1、目的:本研究通過60％四氯化碳油溶液建立肝硬化大鼠模型,以無水酒精選擇性栓塞肝硬化大鼠門靜脈后,通過檢測大鼠肝重與體重比,非栓塞葉PCNA和Ki-67的表達及術(shù)后肝功能來了解肝硬化大鼠行選擇性門靜脈栓塞后對側(cè)肝臟的再生能力和肝硬化大鼠門靜脈栓塞的安全性。
　　 方法:
　　 一、肝硬化動物模型的制作:予60％四氯化碳油溶液0.3ml/100g每5天皮下注射一次,5％乙醇代替飲用水,45天后停止用藥。停藥2周后再行手術(shù)治療

2、。術(shù)后病理、大體觀察均提示肝硬化。
　　 二、動物分組:
　　 1.正常大鼠(65只):隨機取5只作為術(shù)前對照組,余60只隨機分為3組(n=20):假手術(shù)組、門靜脈栓塞組、部分肝切除組,每組于術(shù)后1天、3天、7天及14天分批處死5只大鼠。
　　 2.肝硬化大鼠(65只):隨機取5只作為術(shù)前對照組,余60只隨機分為3組(n=20):假手術(shù)組、門靜脈栓塞組、部分肝切除組,每組于術(shù)后1天、3天、7天及14天分批處死5只

3、大鼠。
　　 三、手術(shù)方式:
　　 1.門靜脈栓塞組(PVE):
　　 麻醉(1％戊巴比妥鈉40mg/kg,腹腔內(nèi)注射)后,由正中切口進入腹腔,分離出供應(yīng)肝左外側(cè)葉、左中葉和中葉的門靜脈左支,予血管夾阻斷近端,細(xì)針穿刺門靜脈左支,注入無水酒精(0.3ml/kg)+碘油(3:1),栓塞完畢后行門靜脈造影明確門靜脈栓塞的肝段,完畢后拔針,棉簽壓迫穿刺處60秒后關(guān)腹。
　　 2.部分肝切除術(shù)組(PH):

4、　　 麻醉(1％戊巴比妥鈉40mg/kg,腹腔內(nèi)注射)后,由正中切口進入腹腔,切斷肝臟的韌帶,結(jié)扎肝左外側(cè)葉、左中葉和中葉的靜脈、動脈和膽管,切除肝左外側(cè)葉、左中葉和中葉,止血滿意后關(guān)腹。
　　 3.假手術(shù)組(SO):
　　 麻醉(1％戊巴比妥鈉40mg/kg,腹腔內(nèi)注射)后,由正中切口進入腹腔,切斷肝臟的韌帶,關(guān)腹。
　　 肝組織病理學(xué)變化采用蘇木精-伊紅染色;肝臟非栓塞葉、殘肝組織采用免疫組織化學(xué)方法檢測增

5、殖細(xì)胞核抗原(PCNA)和Ki-67的表達;檢測肝功能:包括血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransfcrase,AST);稱肝重和體重:計算再生肝葉(肝右葉、尾葉、乳突葉)肝重/體重。所有數(shù)據(jù)采用SAS9.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.肝功能結(jié)果顯示:
　　 (1)正常大鼠組:ALT、AST呈一過性改變,表

6、現(xiàn)為各組術(shù)后第1d升高明顯(p＜0.05),并到達高峰,第3 d即開始下降,第14 d時基本恢復(fù)到術(shù)前水平(p＞0.05)。術(shù)后第1 d,PVE組和PH組較SO組明顯升高(p＜0.05),PH組較PVE組明顯升高(p＜0.05)。
　　 (2)肝硬化大鼠組:ALT、AST呈一過性改變,表現(xiàn)為各組術(shù)后第1 d升高明顯(p＜0.05),并到達高峰,第3 d即開始下降,第14 d時PVE組和SO組基本恢復(fù)到術(shù)前水平(P＞0.05),P

7、H組仍高于術(shù)前水平(p＜0.05)。術(shù)后第1 d,PVE組和PH組較SO組明顯升高(p＜0.05),PH組較PVE組明顯升高(p＜0.05)。術(shù)后1 d肝硬化PVE組血清A L T、AS T顯著高于正常PVE組(p＜0.05)。術(shù)后1 d肝硬化PH組血清A L T、A S T顯著高于正常PH組(p＜0.05)。
　　 2.大鼠再生肝葉肝重/體重:
　　 (1)正常大鼠組:SO組手術(shù)前后再生肝葉肝重/體重?zé)o明顯變化,PVE

8、組和PH組從術(shù)后3 d開始再生肝葉肝重/體重較術(shù)前明顯增加(p＜0.05),與SO組相比有顯著性差異(p＜0.05)。術(shù)后3 d、7 d、14 d PH組較PVE組增加(p＜0.05),三組中PH組再生肝葉肝重/體重增加最顯著。
　　 (2)肝硬化大鼠組:SO組手術(shù)前后再生肝葉肝重/體重?zé)o明顯變化,PVE組和PH組從術(shù)后3 d開始再生肝葉肝重/體重較術(shù)前明顯增加(p＜0.05),與SO組相比有顯著性差異(p＜0.05)。術(shù)后7

9、d、14 d PH組再生肝葉肝重/體重較PVE組增加(p＜0.05);三組中PH組再生肝葉肝重/體重增加最顯著。術(shù)后14 d正常PVE組再生肝葉肝重/體重較肝硬化PVE組增加(p＜0.05),術(shù)后14 d正常PH組再生肝葉肝重/體重較肝硬化PH組增加(p＜0.05)。
　　 3.免疫組織化學(xué)改變:
　　 (1)正常大鼠組:在正常組的肝組織中,術(shù)前PCNA、Ki-67有少量表達,術(shù)后1d PVE組和PH組再生肝葉PCNA、

10、Ki-67的表達較術(shù)前顯著增加(p＜0.05),并達高峰,PH組較PVE組增加明顯(p＜0.05),隨后逐漸下降。
　　 (2)肝硬化大鼠組:在肝硬化組的肝組織中,術(shù)前PCNA、Ki-67有少量表達,但較正常組增多(p＜0.05),術(shù)后1d PVE組和PH組再生肝葉PCNA、Ki-67的表達開始增加,并于術(shù)后7d達到高峰(p＜0.05),PH組較PVE組增加明顯(p＜0.05),隨后逐漸下降。
　　 結(jié)論: