髓系細(xì)胞PTEN在肝再生過程中的作用機(jī)制探究.pdf

1、肝臟是一個具有較強(qiáng)再生能力的器官。正常生理情況下肝細(xì)胞處于細(xì)胞周期靜止?fàn)顟B(tài)，但當(dāng)肝臟受到損傷后，肝細(xì)胞會重新進(jìn)入細(xì)胞周期進(jìn)行增殖，啟動肝再生過程。肝再生是一個復(fù)雜的、多因素參與調(diào)控的過程。在肝再生的過程中，肝臟巨噬細(xì)胞起著關(guān)鍵性的作用，其主要通過分泌TNF-α和IL-6等細(xì)胞因子作用于肝細(xì)胞，促使肝細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期開始增殖。有研究指出第十號染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源基因(Phosphatase and tensin homolog

2、 deleted onchromosome ten，PTEN)是重要的腫瘤抑制基因，它能夠通過負(fù)調(diào)節(jié)多種信號通路，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期等。此外，PTEN的功能具有細(xì)胞特異性，除了抑制細(xì)胞增殖，調(diào)控細(xì)胞周期等作用外，已有文獻(xiàn)報道髓系細(xì)胞PTEN在感染過程中也起到重要的作用，但髓系細(xì)胞PTEN在肝再生過程的作用還未知。
　　本研究主要通過對髓系細(xì)胞PTEN特異性敲除的Lys-Cre;PTENf/f小鼠和對照PTENf/f小鼠建立

3、2/3部分肝切除（Partial Hepatectomy，2/3PHx）手術(shù)模型，進(jìn)而研究髓系細(xì)胞PTEN在肝再生過程中的作用。目前主要得到的實驗結(jié)果如下:
　　1.髓系細(xì)胞PTEN特異性敲除小鼠的細(xì)胞周期行進(jìn)加快
　　首先我們對兩種小鼠在2/3PHx后的肝臟增殖情況進(jìn)行檢測，增殖的細(xì)胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)和Ki67的免疫組化染色結(jié)果顯示髓系細(xì)胞PTEN特異

4、性敲除小鼠的肝實質(zhì)細(xì)胞DNA合成顯著增加，細(xì)胞周期行進(jìn)加快。其次，肝臟質(zhì)量恢復(fù)也是肝再生的一個指標(biāo)，在2/3PHx10天后，髓系細(xì)胞PTEN特異性敲除的小鼠肝重與體重的比例(肝重/體重×100)有明顯的增加，肝再生速度加快。
　　2.髓系細(xì)胞PTEN特異性敲除小鼠的有絲分裂指數(shù)增加
　　根據(jù)HE染色結(jié)果計算有絲分裂指數(shù)，結(jié)果顯示髓系細(xì)胞PTEN特異性敲除后有絲分裂指數(shù)顯著增加，進(jìn)一步表明肝再生速度的加快。
　　3.髓系

5、細(xì)胞PTEN特異性敲除小鼠的肝損傷無明顯變化
　　對小鼠肝臟病理學(xué)和血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase，ALT)水平分析發(fā)現(xiàn)，與對照PTENf/f小鼠相比，髓系細(xì)胞PTEN特異性敲除的Lys-Cre;PTENf/f小鼠的肝臟損傷程度沒有明顯變化，并且肝臟巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子TNF-α和IL-6的mRNA水平也無顯著性差異。
　　此外，我們檢測了兩種小鼠骨髓來源的巨噬細(xì)胞(Bone Mar