SHMT2在小鼠肝再生過程中的變化規(guī)律及作用.pdf

1、目的:
　　探索絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶2(serine hydroxymethyl transferase2，SHMT2)在小鼠肝再生過程中的表達(dá)規(guī)律，以及其在小鼠肝再生過程中發(fā)揮的作用。
　　方法:
　　1.SPF級 C57BL/6小鼠90只分為肝切除組(2/3PH)50只、假手術(shù)組(Sham組)10只、尾靜脈注射攜帶 SHMT2 shRNA腺病毒組(shSHMT2組)10只、尾靜脈注射陰性對照腺病毒組(Control組

2、)10只、尾靜脈注射生理鹽水空白對照組（NS組）10只。小鼠肝切除之后，記錄切除肝臟的重量，并在對應(yīng)的時間點1、3、5、7、9d收集肝臟組織及血清。同時收集Sham組的肝臟組織及血清，用qPCR、Western blot（WB）和免疫組化檢測 SHMT2及其下游分子甘氨酸脫羧酶（glycine decarboxylase，GLDC）的變化規(guī)律，自動生化分析儀檢測血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT

3、)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate transaminase，AST)的水平。
　　2.取shSHMT2組、Control組及NS組的小鼠肝臟組織，冰凍切片觀察綠色熒光強(qiáng)度，Western blot檢測SHMT2表達(dá)量驗證腺病毒的干擾效率，用免疫組化法檢測三組肝臟組織中增殖細(xì)胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA）的表達(dá)，比較三者肝再肝臟重量、肝再生度、肝指數(shù)及小鼠血清中的ALT、

4、AST水平。
　　結(jié)果:
　　SHMT2及其下游分子 GLDC，均在2/3肝切除術(shù)后開始升高，并分別在小鼠肝再生的后第5天，第7天達(dá)到峰值，qPCR結(jié)果揭示了與WB相似的趨勢，SHMT2 mRNA表達(dá)量逐漸上升在第5天達(dá)到最高為第1天的1.63倍(P＜0.05)。在干擾 SHMT2之后，NS組與shSHMT2組比較，再生肝臟的重量由(0.79±0.13) g降低至(0.63±0.11) g(P＜0.05)，再生度由(36.3

5、7±2.21)%降低至(31.33±1.92)%，肝指數(shù)由(3.76±0.44)%降低至(3.13±0.29)%，并且肝功能指標(biāo) ALT由(70.00±9.52) U/L升高至(154.15±16.49) U/L，AST由(140.09±32.85) U/L升高至(403.41±68.63) U/L(P＜0.05)，PCNA陽性率從(53.6±2.3)%降低至(39.0±3.2)%(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1. S