鯉魚腸道中乳酸菌粘附相關(guān)蛋白質(zhì)的鑒定研究.pdf

1、粘附(adhesion)是指細(xì)菌與粘液(mucus)或上皮細(xì)胞通過生物化學(xué)作用產(chǎn)生的特異性粘連,是細(xì)菌定植的第一步.腸道中各種粘附相關(guān)成分是介導(dǎo)細(xì)菌粘附的基礎(chǔ),對這些成分的研究分析是闡明益生菌對腸道粘附機(jī)理的必要條件,而粘附機(jī)理的深入研究對于消化道微生態(tài)環(huán)境的改善以及病原菌的生態(tài)防治均具有重要意義.益生乳酸菌在腸道中的定植能夠排斥外來病原菌的入侵,從而起到生物拮抗的作用. 本文以從健康牙鲆腸道分離篩選的乳桿菌新種L15(Lact

2、obacillus L15)和嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus ATCC4356)為實(shí)驗(yàn)菌株,對鯉魚腸粘液中參與乳酸菌粘附的受體蛋白進(jìn)行鑒定和分析,并對該粘附受體在腸道上皮細(xì)胞表面的分布進(jìn)行了研究. 用酯化生物素標(biāo)記的L15和嗜酸乳桿菌表面蛋白進(jìn)行蛋白印跡實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,在鯉魚腸道前段及中段的粘液中有相同的粘附相關(guān)受體,分子量約為26.2kDa;在鯉魚腸道的后段,粘液成分與前段和中段的差異較大,而且

3、沒有粘附相關(guān)條帶.用該受體蛋白免疫小鼠,免疫印跡檢測抗血清的特異性,結(jié)果表明在1∶200稀釋度可特異性地與粘液中的受體蛋白結(jié)合.免疫印跡的結(jié)果進(jìn)一步證實(shí),在鯉魚腸粘液的前段和中段均有26.2kDa的受體蛋白存在,雖然L15和ATCC4356的表面蛋白成分不同,但它們在鯉魚腸粘液中均有相同的受體成分,而在后段的腸粘液中無此受體蛋白. 應(yīng)用體外粘附模型,研究了粘附受體蛋白在2種乳酸菌和致病性大腸桿菌對鯉魚腸粘液粘附中的作用.3種菌對

4、鯉魚腸粘液均呈現(xiàn)不同程度的特異性粘附,而受體蛋白的抗血清對這3種菌的粘附均有明顯的抑制作用,說明該26.2KD的蛋白與L15和嗜酸乳桿菌的粘附相關(guān),為這2種菌在鯉魚腸粘液中的粘附受體,而且也是大腸桿菌在鯉魚腸道內(nèi)定植的粘附受體蛋白.乳酸菌與大腸桿菌對鯉魚腸粘液均有一定的粘附作用,因此在宿主腸道內(nèi)可競爭同一受體,從而使乳酸菌達(dá)到拮抗病原菌定植的作用,抵御病害的侵襲.通過對鯉魚腸道石蠟切片進(jìn)行HE染色和AB-PAS染色,顯示了鯉魚腸道的組織