骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為表皮干細(xì)胞的研究.pdf

1、背景：燒傷、創(chuàng)傷和整形外科的創(chuàng)面修復(fù)需要大量自體皮膚，組織工程化皮膚是解決自體皮來源的良好方法。理想的組織工程化皮膚應(yīng)該是能在盡量短的時(shí)間內(nèi)合成包含有表皮、真皮和各種皮膚附件(汗腺、毛囊、皮脂腺等)以及黑色素細(xì)胞和朗格罕氏細(xì)胞的永久性覆蓋的皮膚，但至今還沒有任何一種組織工程皮膚能作為理想的皮膚覆蓋物，其中種子細(xì)胞和支架材料是組織工程研究的關(guān)鍵。表皮干細(xì)胞具有多分化潛能，除再生皮膚的多層表皮結(jié)構(gòu)外，還形成汗腺、毛發(fā)和毛囊等皮膚附屬器官，但

2、由于目前獲取與純化表皮干細(xì)胞較為困難，從而妨礙了表皮干細(xì)胞作為組織工程化皮膚種子細(xì)胞的應(yīng)用。本研究以HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)上清液聯(lián)合EGF作為誘導(dǎo)條件，觀測(cè)BMSC<,s>經(jīng)誘導(dǎo)后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞生物化學(xué)的變化，以明確BMSCs能否在體外誘導(dǎo)分化為表皮干細(xì)胞；通過以BrdU標(biāo)記BMSCs后，植入全層皮膚缺損創(chuàng)面，觀察其在皮膚缺損創(chuàng)面愈合中的作用，了解骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能否在體內(nèi)誘導(dǎo)分化表皮干細(xì)胞；并觀察其在明膠／聚己酸內(nèi)酯電紡納米支架中生長(zhǎng)

3、的情況。為選用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為組織工程化皮膚的種子細(xì)胞提供理論依據(jù)。 第一章：兔自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)在皮膚缺損創(chuàng)面愈合中的作用，探討其作為種子細(xì)胞修復(fù)與重建皮膚的可能性。 方法：取成年家兔30只，抽取骨髓，采用直接貼壁法分離、純化和培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；采用原位雜交試劑盒對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行cDNA探針原位雜交檢測(cè)CD44，鑒定其為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；

4、于兔背部?jī)蓚?cè)制造全層皮膚缺損創(chuàng)面，以Ⅰ型膠原為載體，將己用5-溴脫氧尿嘧啶(BrdU)標(biāo)記的自體BMSCs植于左側(cè)創(chuàng)面，右側(cè)創(chuàng)面以I型膠原為對(duì)照。分別于術(shù)后6、12d將創(chuàng)面大小描印于無菌透明薄膜上，按公式計(jì)算創(chuàng)口收縮率，記錄治療組和對(duì)照組愈合時(shí)間。隨機(jī)于第4、5周選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，取創(chuàng)面中央直徑0.5 cm范圍的皮膚，分別行常規(guī)組織學(xué)檢查(HE染色)和BrdU免疫組織化學(xué)染色檢查。 結(jié)論：BMSCs可能通過分化為表皮干細(xì)胞的方式參與

5、了表皮和皮膚附件毛囊的修復(fù)與重建，具有促進(jìn)創(chuàng)面愈合作用。 第二章：兔BMSCs在明膠／聚己酸內(nèi)酯電紡納米支架中生長(zhǎng)的研究 目的：了解BMSCs在明膠／聚己酸內(nèi)酯電紡納米支架中生長(zhǎng)、增殖的可能性；比較I型膠原(鼠尾膠原)與聚羥基乙酸(PGA)支架和明膠／聚己酸內(nèi)酯電紡納米支架的優(yōu)越性。 方法：將分離、純化、培養(yǎng)的BMSCs分別種植于已消毒好的明膠／聚己酸內(nèi)脂電紡復(fù)合納米纖維細(xì)胞支架(實(shí)驗(yàn)組)和已制備好的I型膠原／P

6、GA復(fù)合支架(對(duì)照組)，置于37℃、5％CO<,2>及飽和濕度條件下培養(yǎng)，3天后送掃描電鏡觀察。 結(jié)論:明膠/聚己酸內(nèi)酯電紡復(fù)合納米纖維支架作為組織工程的支架材料比I型膠原/PGA復(fù)合支架材料更具優(yōu)勢(shì)。BMSCs能夠牢固地黏附在明膠/聚己酸內(nèi)酯電紡復(fù)合納米纖維支架的網(wǎng)眼之中生長(zhǎng)良好。 第三章 人骨髓商充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為表皮干細(xì)胞的初步研究 目的:探討體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為表皮干細(xì)胞的可行性。