miniSTR復(fù)合擴(kuò)增體系的研制與開發(fā).pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文miniSTR復(fù)合擴(kuò)增體系的研制與開發(fā)姓名：白雪申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：法醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：叢斌20090401中文摘要310／3130基因分析儀對產(chǎn)物進(jìn)行檢測，Genemapper32軟件分析結(jié)果；根據(jù)不同引物濃度√M92濃度、不同退火溫度、不同循環(huán)次數(shù)下復(fù)合擴(kuò)增的效果對復(fù)合體系進(jìn)行優(yōu)化。⑧根據(jù)群體遺傳學(xué)研究的結(jié)果，應(yīng)用分子克隆技術(shù)構(gòu)建各基因座等位基因標(biāo)準(zhǔn)分型物，并根據(jù)國際法醫(yī)遺傳學(xué)會(internationals

2、ocietyofforensicgenetics，ISFG)推薦的命名原則對各等位基因進(jìn)行命名，同時根據(jù)檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析編制出miniSTR復(fù)合擴(kuò)增體系的基因分型模版。④對該熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系的靈敏度、種屬特異性、可重復(fù)性及對陳舊、腐敗降解檢材DNA的檢測能力進(jìn)行了研究；用實際案例進(jìn)行驗證，并與商品化試劑盒進(jìn)行比較。結(jié)果：①成功構(gòu)建了兩個熒光標(biāo)記miniSTR復(fù)合擴(kuò)增體系，其中復(fù)合體系1包含D10S1248，D2S441，D1S1

3、677和D9S2157四個基因座，復(fù)合體系2包含D9S1122，D10S1435，D12ATA63，D2S1776和Amelogenin五個基因座。應(yīng)用該體系對300份中國漢族無關(guān)個體樣本進(jìn)行檢驗分析，經(jīng)群體遺傳學(xué)計算，該系統(tǒng)的累積個人識別率和非父排除率分別為O99999999228和098547130732。②本實驗構(gòu)建的兩個復(fù)合擴(kuò)增體系條件易于優(yōu)化，采用國產(chǎn)Taq酶進(jìn)行擴(kuò)增，即可得到滿意的擴(kuò)增產(chǎn)物和分型結(jié)果。相對于國外昂貴的試劑盒，

4、它是一種成本低廉但效率高的miniSTR基因座復(fù)合擴(kuò)增體系。③應(yīng)用分子克隆技術(shù)，對9個基因座的64個等位基因進(jìn)行克隆，經(jīng)過調(diào)整各基因座等位基因的含量，構(gòu)建出了兩組復(fù)合體系的等位基因標(biāo)準(zhǔn)對照體系。根據(jù)實驗數(shù)據(jù)和測序的命名結(jié)果設(shè)置基因分析命名參數(shù)指標(biāo)，建立了兩個熒光標(biāo)記miniSTR復(fù)合擴(kuò)增體系的基因分型命名模版，可以對樣本準(zhǔn)確分型。④法醫(yī)應(yīng)用性研究證明該體系具有良好的種屬特異性，除恒河猴在Amelogenin出現(xiàn)色譜峰外，其余8個基因座在

5、8種常見動物中均無特異性產(chǎn)物峰出現(xiàn)；對同一個體的不同組織檢測結(jié)果一致；在0125ngDNA模板量的情況下，可對9個基因座進(jìn)行正確分型；通過對陳舊樣本和降解模型的研究證明，該體系對降解檢材有良好的擴(kuò)增效果，較常規(guī)大片段STR試劑盒擴(kuò)增成功率高，可用于常規(guī)試劑盒擴(kuò)增失敗的降解樣本的分型；通過8個實際案例證明，該體系能用于法醫(yī)學(xué)實踐中，結(jié)果與鑒定結(jié)論一致。結(jié)論：本實驗成功的構(gòu)建了適合中國漢族人群的兩個熒光標(biāo)記miniSTR復(fù)合擴(kuò)增體系。該熒光