三個miniSTR基因座熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系的建立及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究.pdf

1、四川大學(xué)碩士學(xué)位論文三個miniSTR基因座熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系的建立及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究姓名：蔣師申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：法醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：侯一平20070420叫J11人學(xué)碩f：論文中文摘要三個miniSTR基因座熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系的建立及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究研究生：蔣師導(dǎo)師：侯一平教授四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院成都(610041)目的本課題旨在建立新的miniSTR熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系，并按照美國DNA分析方法技術(shù)工作組(TWGDA

2、M)的指導(dǎo)方案，進(jìn)行法醫(yī)學(xué)應(yīng)用性研究。方法從已有國內(nèi)頻率資料的STR基因座中篩選出可用于設(shè)計(jì)MiniSTR引物的基因座，進(jìn)行引物設(shè)計(jì)；用未標(biāo)記的新引物在銀染顯色方法下進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，選出復(fù)合成功基因座定購熒光標(biāo)記引物；制作等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物；采用美國ABl310遺傳分析儀進(jìn)行熒光標(biāo)記引物復(fù)合擴(kuò)增試驗(yàn)，并優(yōu)化擴(kuò)增條件，對不同退火溫度下復(fù)合擴(kuò)增的效果進(jìn)行研究；對復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)的靈敏度、基因座的種屬特異性、案例應(yīng)用、降解模型、陳舊樣本等法醫(yī)學(xué)

3、應(yīng)用進(jìn)行研究。結(jié)果成功設(shè)計(jì)了D19S591，D2S2944，D18S872基因座的小于130bp的miniSTR擴(kuò)增引物，成功建立了D19S591。D2S2944，D18S872的miniSTR熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系。這～擴(kuò)增體系條件易于優(yōu)化，采用國產(chǎn)Taq酶進(jìn)行擴(kuò)增，即可得到滿意的擴(kuò)增產(chǎn)物和分型結(jié)果。相對于國外昂貴的試劑盒，它是一種成本低廉但效率高的STR基因座復(fù)合擴(kuò)增體系。法醫(yī)學(xué)應(yīng)用性研究表明：三個基因座有較高的種屬特異性；該體系的檢