Ankrd17在細(xì)胞周期調(diào)控中的功能研究.pdf

1、細(xì)胞周期調(diào)控主要是通過(guò)蛋白質(zhì)激酶介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)完成的,而Cyclin-CDK蛋白激酶復(fù)合體又為其中最為關(guān)鍵的調(diào)控分子.不同的Cyclm-CDK復(fù)合體在細(xì)胞周期的不同時(shí)相發(fā)揮不同的作用.CyclinE/CDK2復(fù)合體在細(xì)胞周期的G1/S轉(zhuǎn)換過(guò)程中扮演著非常重要的角色.目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些分子與Cyelin/CDK2激酶復(fù)合體相互作用而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的過(guò)程.但是Cyclin/CDK2調(diào)控細(xì)胞周期詳盡的作用機(jī)制尚未明晰. 本研究利用TAP(

2、Tandem Affinity Pufification,TAP)親合純化技術(shù)篩選了與CDK2相互作用的蛋白-Ankrd17,且已證明該蛋白為CyclinE/CDK2的底物.本文旨在研究Aukrd17蛋白在細(xì)胞周期中的功能.首先,通過(guò)RT-PCR的方法檢測(cè)Ankrd17在人正常組織、正常細(xì)胞株及腫瘤細(xì)胞株中基因的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)Ankrd17基因在人不同正常組織、正常及腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá),且在細(xì)胞周期不同時(shí)段表達(dá)水平基本恒定.其次,構(gòu)建了

3、人源Ankrd17基因的真核表達(dá)載體,并在哺乳細(xì)胞HCT116中進(jìn)行過(guò)量表達(dá).采用表達(dá)EGFP的質(zhì)粒和目的基因Ankrd17共轉(zhuǎn)染HCT116細(xì)胞的方法,篩選陽(yáng)性細(xì)胞分析當(dāng)Ankrd17與CyclinE/CDk2相互作用時(shí)其在細(xì)胞周期G1/S轉(zhuǎn)換中的作用.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在HCT116細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)Ankrd17蛋白對(duì)細(xì)胞周期有明顯的促進(jìn)作用.再次,構(gòu)建了的CyclinA1的原核表達(dá)載體,并進(jìn)行了GST-CyclinA1融合蛋白的表達(dá)純化