細胞分化在細胞周期進程中的時相性研究.pdf

1、第一部分：全反式維甲酸誘導HL-60細胞分化的細胞周期時相性 背景和目的：細胞分化是細胞生物學研究的核心問題之一，研究發(fā)現(xiàn)當細胞受細胞外生長信號刺激后，細胞周期機制驅動著細胞的增殖，聯(lián)系著細胞的凋亡，進而發(fā)現(xiàn)其調控著細胞的分化。但細胞周期機制如何調控細胞分化尚不明確。在本部分實驗中我們用全反式維甲酸(alltransretinoidacid，ATRA)誘導HL-60細胞分化，研究此分化模型中細胞周期的變化以及細胞分化在細胞周期中

2、的時相性規(guī)律。 方法：HL-60細胞經分化誘導劑ATRA(終濃度為1μmol/L)誘導不同時間點后，通過流式細胞儀檢測細胞表面分化標志物CD11b的表達以及分選后共聚焦顯微技術來證實細胞分化模型構建成功；用單參數流式細胞術檢測細胞內DNA含量來分析分化細胞的細胞周期分布；創(chuàng)新應用CD11b/DNA雙參數流式細胞數術同時檢測分化細胞表面抗原CD11b的表達及分化細胞核DNA含量，觀察分化細胞在細胞周期中的時相性表達。 結果

3、：HL-60細胞經ATRA誘導后，細胞表面分化抗原CD11b表達明顯升高，誘導72小時陽性率達到16.68％(對照組細胞陽性率為1.65％)，分選CD11b表達陽性的細胞用共聚焦顯微鏡觀察，細胞核形態(tài)向成熟粒細胞變化。誘導后HL-60細胞阻滯于G0/G1期，且CD11b表達陽性細胞主要位于G0/G1期。 結論：ATRA能誘導HL-60細胞分化，分化細胞主位于細胞周期進程中的G0/G1期。 第二部分：阿非迪霉素誘導HL-6

4、0細胞分化的細胞周期時相性 目的：用阿非迪霉素誘導HL-60細胞來構建細胞分化模型，研究細胞細胞分化在細胞周期進程中的時相性表達。 方法：HL-60細胞經分化誘導劑阿非迪霉素(終濃度為1μg/ml)誘導不同時間點后，通過流式細胞儀檢測細胞表面分化標志物CD11b的表達以及分選后共聚焦顯微技術來證實細胞分化模型構建成功；用單參數流式細胞術檢測細胞內DNA含量來分析分化細胞的細胞周期分布；應用CD11b/DNA雙參數流式細胞

5、數術同時檢測分化細胞表面抗原CD11b的表達及分化細胞核DNA含量。 結果：HL-60細胞經阿非迪霉素誘導，12小時后細胞表面分化抗原CD11b表達有所升高，陽性率為9.68％(對照組細胞陽性率為0.33％)，分選CD11b表達陽性的細胞用共聚焦顯微鏡觀察，細胞核形態(tài)向成熟粒細胞變化。誘導后HL-60細胞阻滯于S期，且CD11b表達陽性細胞主要位于S期。 結論：阿非迪霉素能誘導HL-60細胞分化，分化細胞主要位于細胞周期

6、進程中的S期。 第三部分：六亞甲基二乙酰胺誘導HL-60細胞分化的細胞周期時相性 目的：六亞甲基二乙酰胺(HMBA)是一種能誘導急性髓系白血病細胞分化的極性化合物，我們在這部分研究中構建HMBA誘導HL-60細胞的分化模型來觀察細胞周期分布的變化以及分化細胞在細胞周期中的時相性規(guī)律。 方法：HL-60細胞經分化誘導劑HMBA(終濃度為10μmol/L)誘導不同時間點后，通過流式細胞儀檢測細胞表面分化標志物CD11

7、b的表達以及分選后共聚焦顯微技術來證實細胞分化模型構建成功；用單參數流式細胞術檢測細胞內DNA含量來分析分化細胞的細胞周期分布；應用CD11b/DNA雙參數流式細胞數術同時檢測分化細胞表面抗原CD11b的表達及分化細胞核DNA含量，研究細胞分化在細胞周期進程中的發(fā)生規(guī)律。 結果：HL-60細胞經HMBA誘導后，細胞表面分化抗原CD11b表達明顯升高，誘導24小時陽性率達到28.12％(對照組細胞陽性率為0.60％)，共聚焦顯微鏡