檸檬酸-EDC-NHS膠原凝膠修復(fù)破損纖維環(huán)的實驗研究.pdf

1、目的：
　　通過觀察比較組織學(xué)和影像學(xué)結(jié)果，探討利用檸檬酸-EDC/NHSⅠ型膠原凝膠修復(fù)鼠尾纖維環(huán)損傷，減緩椎間盤退變的效果。
　　方法：
　　使用提取于鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原凝膠，檸檬酸(CA)、1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）-碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)作為交聯(lián)劑，將Ⅰ型膠原凝膠與各交聯(lián)劑按質(zhì)量比Col∶CA∶EDC∶NHS=50∶6∶12∶8(CA6)、Col∶CA∶EDC∶NHS=50∶

2、3∶12∶8(CA3)、Col∶CA∶EDC∶NHS=50∶0∶12∶8(CA0)混合制成Ⅰ型膠原混合凝膠。建立鼠尾椎間盤纖維環(huán)穿刺模型，使用清潔級SD大鼠，共48只，隨機分為假手術(shù)組(n=8)、CA-EDC/NHS凝膠(CA6)治療組(n=10)、CA-EDC/NHS凝膠(CA3)治療組(n=10)、EDC/NHS凝膠(CA0)治療組(n=10)、穿刺未治療組(n=10)。所有實驗動物尾椎間盤穿刺后，分別使用各實驗組對應(yīng)的凝膠填充纖維

3、環(huán)破口。各實驗組所使用的混合凝膠均需要進(jìn)行細(xì)胞毒性和生物相容性實驗。各組實驗動物分別于穿刺前和治療后1、2、4周行小動物X攝片、治療后1、2、4周行小動物MRI檢查，統(tǒng)計分析不同時間點椎間隙高度系數(shù)(％DHI)、髓核像素值以及改良Pfirrmann分級，并于第4周時將所有大鼠處死，取完整椎間盤標(biāo)本進(jìn)行H.E和番紅O染色，而后組織學(xué)照片，觀察比較髓核與纖維環(huán)改變。
　　結(jié)果：
　　1.穿刺4周后，CA-EDC/NHSⅠ型膠原凝

4、膠(CA6)治療組對比假手術(shù)組的鼠尾椎間盤，只發(fā)生了較為輕微的退變，髓核組織基本上保持的比較完整，并且通過觀察統(tǒng)計椎間盤高度系數(shù)、髓核像素值、改良Pfirrmann分級和組織學(xué)染色切片結(jié)果都要優(yōu)于其余兩個治療組(CA3、CA0)和穿刺未治療組。
　　2.穿刺4周后，沒有加入檸檬酸的EDC/NHSⅠ型膠原凝膠(CA0)在各觀測結(jié)果中要遜色于兩個含有檸檬酸的治療組(CA6、CA3)，但仍然優(yōu)于未治療組。
　　3.通過觀察CA-E

5、DC/NHSⅠ型膠原凝膠(CA6)治療組的組織學(xué)結(jié)果，無顯著的軟骨終板以及周圍組織退變發(fā)生，沒有在穿刺針道的周圍發(fā)現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤和瘢痕組織，并且在針道的盡頭可見一團凝膠狀物質(zhì)在斷裂的纖維環(huán)組織之間形成了橋接使其閉合。
　　結(jié)論：
　　1.大鼠鼠尾椎間盤纖維環(huán)在穿刺后，具有較差的自我修復(fù)能力，破損長期存在導(dǎo)致髓核組織逐漸流失，椎間隙高度下降。
　　2.檸檬酸-EDC/NHSⅠ型膠原凝膠具有較低的細(xì)胞毒性，以及良好的生物相