大腸桿菌內(nèi)C-di-GMP介導(dǎo)的信號(hào)通路中YdiV和YdaM的結(jié)構(gòu)與功能研究.pdf

1、大腸桿菌內(nèi)C ．d i ．G M P 介導(dǎo)的信號(hào)通路中Y d i V 和Y d a M 的結(jié)構(gòu)與功能研究S t u d y o n t h ef u n c t i o na n d c r y s t a ls t r u c t u r e s o f Y d i V a n dY d a M i nE ．c o l is i g n a l i n g p a t h w a y t r a n s d u c e db y C

2、- d i —G M P者： 郭立明業(yè)： 微生物學(xué)師： 谷立川教授2 0 10 年5 月2 0 日作專導(dǎo)山東大學(xué)碩士學(xué)位論文目 錄中文摘要????????????????????????????????????。5A b s t r a c t ????????????????．????．????????????????????????????．6縮略詞?????????????????????????????????????．．7第一

3、章前言???????????????????????????????????．8一、研究背景??????????????????????????????．．81 ．1 細(xì)菌的群體感應(yīng)效應(yīng)????????????????????????．81 ．2 第二信使C - d i ．G M P ????????????????????????．1 01 ．3C ．d i - G M P 的生物功能???????????????????????．1

4、 31 ．4C ．d i ．G M P 的作用機(jī)制???????????????????????．1 41 ．5 人腸桿菌中的Q S 系統(tǒng)和C - d i - G M P 信號(hào)通路?????????????1 7二、本文的主要內(nèi)容、目的、意義及創(chuàng)新點(diǎn)?????????????????一1 8第二章蛋白的表達(dá)純化?????????????????????????????．．2 l2 ．1 材料與方法????????????????????

5、?????????．．2 l2 ．1 ．1 菌株及質(zhì)粒???????????????????????????2 l2 ．1 ．2 主要儀器與試劑?????????????????????????2 l2 ．2 實(shí)驗(yàn)方法??????????????????????????????．2 52 ．2 ．1 Y d i V 及Y d a M 的序列分析????????????????????．．2 52 ．2 ．2P C R 擴(kuò)增及瓊脂糖凝膠電

6、泳????????????????????2 52 ．2 ．3P C R 產(chǎn)物回收??????????????????????????2 62 ．2 ．4 限制性內(nèi)切酶切P C R 產(chǎn)物?????????????????????2 72 ．2 ．5 表達(dá)載體的制備?????????????????????????2 72 ．2 ．6 連接??????????????????????????????2 92 ．2 ．7 轉(zhuǎn)化???????

7、????????????????????????????????一2 92 ．2 - 8 重組蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)表達(dá)????????????。：?????????2 92 ．2 ．9 測(cè)序鑒定重組質(zhì)粒????????????????????????3 02 ．2 ．1 0 蛋白質(zhì)的人量表達(dá)???????????????????????．3 02 ．2 ．1 1 重組蛋白質(zhì)的純化???????????????????????．．3 02 ．3

8、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析???????????????????????????．3 22 ．3 ．1 Y d i V 及Y d a M 的序列分析結(jié)果??????????????????．．3 22 ．3 ．2P C R 擴(kuò)增及瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果??????????????????3 42 ．3 ．3 限制性內(nèi)切酶艤酶切P C R 產(chǎn)物??????????????????．．3 52 ．3 ．4 限制性內(nèi)切酶艤酶切p E T l 5 b 、p G

9、 L 0 1 、p E T 2 1 b 載體?????????3 62 3 ．5 重組質(zhì)粒測(cè)序鑒定????????????????????????3 72 ．3 ．7 重組蛋白的人餐表達(dá)與純化????????????????????3 9第三章蛋白質(zhì)的晶體生長(zhǎng)與結(jié)構(gòu)解析???????????????????????。4 33 ．1 材料與試劑?????????????????????????????．4 33 ．2 實(shí)驗(yàn)方法??????