

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、A大腸桿菌感受態(tài)的制備(CaCl2法)(《水稻NR和NIR基因啟動子的克隆及功能驗證》第38頁)1材料、設(shè)備及試劑材料、設(shè)備及試劑1.1材料大腸桿菌DH5α、BL21、Rossette、JM109菌株1.2試劑LB液體培養(yǎng)基:蛋白胨10gL酵母提取物5gLNaCl10gLNaOH(1molL)1mLL400mL0.1ML預(yù)冷的CaCl2溶液(高溫高壓滅菌)50%甘油75%酒精95%酒精液氮1.3實驗設(shè)備接種環(huán)、酒精燈,打火機,75%酒精
2、,95%酒精,50mL滅菌三角瓶4個,250mL滅菌的三角瓶4個,移液搶(5mL、200μL,1000μL),滅菌的槍頭(5mL、200μL,1000μL),離心管(1.5mL,50mL)恒溫搖床滅菌鍋,紫外分光光度計,超凈工作臺,制冰機,冰盒,高速冷凍離心機。2實驗步驟實驗步驟1、從新鮮培養(yǎng)的大腸桿菌DH5α平板上挑取一個單菌落,接種于5mL新鮮LB培液體養(yǎng)基中,于37℃,200rpm振蕩培養(yǎng)過夜。2、培養(yǎng)12~16h,取1ml培養(yǎng)物
3、加入到100mL新鮮LB培液體養(yǎng)基中,于37℃,200rpm振蕩培養(yǎng)至OD=0.4~0.6(3~4h)3、在無菌條件下將菌液轉(zhuǎn)移到250mL離心管中,置于冰上10min.4、于4℃,3000rpm離心5~10min,棄上清,收集菌體。5、加入20mL預(yù)冷的0.1MLCaCl2溶液重新懸沉淀,至于冰上30min(嚴格)6、于4℃,3000rpm離心5~10min,棄上清,收集菌體。7、加入4mL0.1MLCaCl2溶液及15%(最終濃度)
4、甘油(50%的甘油1.71428mL),重懸沉淀。8、以100μL每管分裝于1.5mL凍存管中保存于液氮。3試驗結(jié)果試驗結(jié)果4注意事項注意事項CE.coliDH5α感受態(tài)細胞的制備及轉(zhuǎn)化1目的學(xué)習(xí)掌握CaCl2法制備感受愛的原理和方法學(xué)習(xí)掌握感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化的原理和方法把前面實驗的兩個連接反應(yīng)結(jié)果和一種商品質(zhì)粒進行轉(zhuǎn)化實驗2原理2.1名詞概念感受態(tài)細胞:處于接受外源DNA的生理狀態(tài)的細胞細胞轉(zhuǎn)化:從遺傳學(xué)出發(fā),轉(zhuǎn)化是特指以質(zhì)粒DNA或以它
5、為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細菌細胞,并使其生物學(xué)特性發(fā)生可遺傳的變化。細胞感染:指以噬菌體、病毒作為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細胞的過程,使細胞發(fā)生可遺傳的變異,它是與細胞轉(zhuǎn)化概念相對而定義的細胞致敏:用理化方法誘導(dǎo)細胞進入感受態(tài)的操作過程2.2原理培養(yǎng)至對數(shù)生長期的E.coliDH5α菌在0攝氏度經(jīng)過低滲CaCl2溶液致敏處理,就可成為高效的感受態(tài)細胞,這種感受態(tài)細胞與質(zhì)粒混勻置0攝氏度30min,混合物中的DNA形成DNase羥基鈣磷
6、酸復(fù)合物黏附于細胞表面,再經(jīng)42攝氏度短時熱激以促進質(zhì)粒進入細胞實現(xiàn)轉(zhuǎn)化,利用質(zhì)粒上的遺傳選擇標記在LB平板上進行初步篩選轉(zhuǎn)化菌落3材料、試劑和儀器3.1材料菌株E.coliDH5α質(zhì)粒pBS實驗6的兩個連接反應(yīng)結(jié)果3.2試劑LB液體培養(yǎng)基:蛋白胨10gL酵母提取物5gLNaCl10gLNaOH(1molL)1mLL固體LB培養(yǎng)基為在液體LB培養(yǎng)基中加1%瓊脂粉LBKan(50μgmL)固體培養(yǎng)皿2個LBAmp(100μgmL)固體培養(yǎng)
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 實驗八、大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備與轉(zhuǎn)化
- 實驗四、五章大腸桿菌感受態(tài)的制備、質(zhì)粒dna的轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)化子篩選概述
- 大腸桿菌
- 大腸桿菌的分離和培養(yǎng)
- 感受態(tài)制備、藍白斑篩選
- 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離》
- 革蘭氏陰性桿菌大腸桿菌介紹
- 禽大腸桿菌病
- 雞大腸桿菌病
- 大腸桿菌病描述
- 大腸桿菌生長曲線
- 球菌、大腸桿菌、厭氧菌
- 工程大腸桿菌制備甲羥戊酸的研究.pdf
- 超聲波介導(dǎo)質(zhì)粒pUC19轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化方法及機制的研究.pdf
- 大腸桿菌生長模型探討
- 大腸桿菌表達體系介紹
- 大腸桿菌與合成生
- 鈾和鉛對大腸桿菌和枯草桿菌毒性的研究.pdf
- 參考譯文大腸桿菌的危險
- 大腸桿菌中的基因表達
評論
0/150
提交評論