人BDNF在CHO及大腸桿菌中的表達(dá)及功能研究.pdf

1、目的：將人腦源性神經(jīng)生長因子(Brain-derivedneurotrophicfactor，BDNFl基因在真核及原核表達(dá)系統(tǒng)中進(jìn)行重組表達(dá)，并檢測所表達(dá)蛋白的功能，為開發(fā)高活性的hBDNF基因重組蛋白和基因治療載體奠定基礎(chǔ)。 方法：將由本科室構(gòu)建和保存的人BDNF基因真核表達(dá)載體pTrace，M—EV／V5-His-hBDNF鑒定后導(dǎo)入CHO細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)；同時(shí)將本科室所保存的質(zhì)粒pBV220-BDNF的BDNF基因酶切后重

2、組到表達(dá)效果更高的原核載體pET3．0a+上，鑒定后導(dǎo)入原核細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)。并用SDS-PAGE、RT-PCR、Western-blot、MTT法檢測促PCI2細(xì)胞生長等方法進(jìn)行其抗原性和生物學(xué)活性的檢測。 結(jié)果：原核載體重組構(gòu)建成功。原核和真核表達(dá)載體分別在大腸桿菌和CHO細(xì)胞中均獲成功表達(dá)。在大腸桿菌中表達(dá)的包涵體蛋白約占菌體總蛋白的37．9％，通過透析復(fù)性后，獲得具有活性的表達(dá)蛋白。該復(fù)性后蛋白和CHO細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物均具有較