小鼠卵巢Ski表達水平與卵泡發(fā)育的相關性研究.pdf

1、Sloan-Kettering virus gene product(Ski)是細胞核內的原癌蛋白，屬于Ski/SnoN原癌基因超家族。Ski在各種細胞類型中發(fā)揮著不同的作用。Ski在細胞中的高表達可以誘導原癌細胞癌變和肌肉細胞終末分化。Ski/SnoN是轉化生長因子β(transforming growth factor-β，TGF-β)信號通路中的重要調節(jié)因子，它們以同源或異源二聚體的形式發(fā)揮作用，其中異源二聚體的活性比較高。TGF

2、-β超家族在卵泡發(fā)育中有很重要的作用，有研究發(fā)現，SnoN在KM白小鼠卵巢閉鎖卵泡及黃體化過程中表達，Ski在大鼠卵巢閉鎖卵泡的顆粒細胞中表達，而其在小鼠卵巢中的功能卻還不為人知。因此，本實驗的目的在于研究Ski在不同發(fā)育時期卵泡中的表達情況，并以此來推斷其與小鼠卵泡發(fā)育的關系及在卵泡發(fā)育及黃體化過程中的生物學功能。我們以新生雌性KM小白鼠，處于各發(fā)情周期的雌小鼠及促性腺激素處理的未成熟小鼠卵巢中的卵泡為研究對象，以實時定量PCR和免疫

3、組化作為技術手段，檢測Ski在卵泡發(fā)育及黃體化過程中的表達情況，進而推斷Ski在卵巢中的功能。
　　實驗結果顯示:在卵泡發(fā)育的早期階段(如原始卵泡裝配、原始卵泡向初級卵泡轉化過程中)，Ski在卵母細胞中呈現陽性表達，其中Ski在卵母細胞核中高度表達。尤其是出生后第一天(postnatal days1，PD1)小鼠卵巢的卵母細胞核中，Ski表達最高。隨著卵泡的發(fā)育，顆粒細胞增生并逐漸分化為多層，卵母細胞體積逐漸變大，膜細胞也逐漸從間

4、質細胞中分化出來，卵巢中開始出現小、中型有腔卵泡，而此時Ski的表達位置逐漸從卵母細胞核向卵母細胞核及其核周轉移，總表達量逐漸降低。發(fā)情周期中，總體上，Ski在發(fā)情間期表達最強，發(fā)情前期和發(fā)情期表達也很明顯，發(fā)情后期表達相對最弱。激素處理的未成熟卵泡中，隨著PMSG、hCG的處理，Ski表達量逐漸減少，其中卵母細胞核周表達很明顯，卵母細胞核中很弱。但是在黃體化形成過程中，檢測到 Ski表達。實時定量 PCR結果顯示，在卵丘擴張過程中，S

5、ki mRNA的表達方式與排卵相關基因的表達方式相反。隨著激素的刺激，卵泡的發(fā)育，排卵相關基因的表達量逐漸升高，尤其在hCG處理4小時后，表達量最高。排卵之后，表達量降低。而Ski mRNA的表達量是隨著排卵的到來逐漸降低，黃體中也檢測到Ski mRNA表達。整個發(fā)育過程中，膜細胞、顆粒細胞內均沒發(fā)現Ski的表達。Ski在卵泡發(fā)育，排卵及黃體形成過程中有特殊的表達方式。所以我們推測，Ski在KM小白鼠卵泡發(fā)育過程中有重要的作用，尤其對早