構建小鼠卵巢早衰模型研究p204在卵泡發(fā)育中的作用.pdf

1、干擾素(IFN)誘導蛋白在干擾素生物學功能的發(fā)揮中起著至關重要的作用，p204是干擾素誘導蛋白p200家族(IFI200)鼠類蛋白成員，該蛋白能與多種蛋白相互作用，并通過這些相互作用發(fā)揮抑制細胞增殖、阻斷細胞周期、促進細胞分化及感應外源雙鏈DNA入侵等重要作用。
　　本論文用D-半乳糖注射法對遺傳背景相同的全身性p204基因敲除型(K0)小鼠和野生型(WT)小鼠進行卵巢早衰模型的構建，觀察小鼠造模過程中的健康狀況。造模八周后組織切

2、片染色觀察卵巢卵泡的發(fā)育的狀況。采用酶聯免疫吸附法檢測血清睪酮(T)、雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、黃體生成素(HL)水平。采用real-timePCR技術對卵巢組織c-myc、Bc卜2、Bax、CYP17A1、CYP19A1等基因表達水平進行檢測與分析。采用免疫組化法檢測Bc卜2、CYP17A1、CYP19A1蛋白在小鼠卵巢組織的表達和分布情況。
　　實驗結果表明，在造模過程中，KO小鼠的體重及卵巢重量均顯著下降(p＜0

3、.01)，而WT小鼠變化不顯著，說明p204敲除使小鼠對D-半乳糖代謝紊亂導致的生理功能變化的影響更大。通過對卵巢組織的切片及染色觀察發(fā)現KO小鼠卵巢閉鎖卵泡和黃體增多，顆粒細胞排列稀疏，說明p204敲除對小鼠卵巢卵泡的發(fā)育產生了一定影響。對小鼠血清激素水平檢測發(fā)現KO小鼠睪酮(T)、促卵泡激素(FSH)、黃體生成素(LH)水平均顯著升高(p＜0.01)。說明p204基因敲除后使小鼠體內的激素水平發(fā)生改變，導致卵泡發(fā)育功能下降，致使卵巢

4、損傷。對小鼠卵巢相關基因檢測中，發(fā)現KO小鼠凋亡相關基因bax、原癌基因c-myc表達水平均顯著升高(p＜0.01)，說明p204敲除對小鼠卵巢顆粒細胞凋亡產生影響，加速了卵巢早衰。還發(fā)現KO小鼠中性激素合成相關基因CYP17A1表達水平顯著升高(p＜0.01)，CYP19A1基因表達水平均顯著降低(p＜0.01)，說明p204敲除使小鼠體內性激素尤其是雄激素表達水平發(fā)生改變，導致小鼠卵泡發(fā)育發(fā)生障礙，形成卵巢早衰。免疫組化結果顯示缺失

5、p204導致小鼠卵巢內Bcl-2、CYP17A1、CYP19A1蛋白的表達和分布發(fā)生改變，加速卵巢早衰形成。
　　以上結果表明p204在小鼠卵巢卵泡發(fā)育中可能通過調控顆粒細胞增殖和凋亡的過程從而抵制卵巢早衰的形成。本論文為初步探究p204在小鼠POF卵泡發(fā)育中的作用，為進一步闡明卵巢早衰卵泡發(fā)育障礙的發(fā)病機制和預防早衰奠定基礎，具有重要的理論意義和臨床價值。
　　本研究的創(chuàng)新點在于:1）使用D-半乳糖注射法對C57品系p20